實驗方法原理
| 報告基因是一個分子生物學概念，它是指一類在細胞、組織/器官或個體處于特定情況下會表達并使得他們產生易于檢測、且實驗材料原本不會產生的性狀的基因。作為報告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件：①已被克隆和全序列已測定；②表達產物在受體細胞中本不存在，即無背景，在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物；③其表達產物能進行定量測定。 | |
| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 一、完整組織的提取 1. 取少量（5~50 mg ) 葉片、根、愈傷等組織樣品，所需樣品量由材料決定。 2. 離心管中加入 GUS 緩沖液（50~200 ul），組織勻漿。 3. 16000 g，4℃ 離心 15 min，沉淀破碎的細胞。 4. 檢測提取物的蛋白質濃度。 5. 用 GUS 緩沖液稀釋提取物，使蛋白質總濃度為 0.1 mg/ ml。 6. 立即使用提取物，或者 -80℃ 保存。 二、原生質體制備 1. 通過離心（50 g，1 min），小份（1x106）收集轉化的原生質體，用 2 ml 的 3 M 緩沖液重懸。 2. 取一份原生質體，用血細胞計數板計數。 3. 將剩余的原生質體 50 g 離心 1 min，用 150 ul 的 GUS 緩沖液重懸，短暫渦旋（或者通過 26 G 的抽吸），靜置 5 min。 4. 離心（16000 g，4℃ 15 min ) ，使細胞碎片沉淀。檢測提取物的蛋白質濃度，參照完整組織樣品的方法對其進行稀釋。 |
| 其他 | 本實驗來源「麥類作物轉基因技術與田間鑒定實驗指南」〔英〕H.D.瓊斯 P.R .休里 主編。 |