按細胞比重分離B細胞
1.將2~3ml含3×107純化的B細胞(B細胞>90%)的細胞懸液加到3ml Percoll溶液(比重1.074)上,水平離心1000×g 20分鐘。
2.吸去無細胞上清液,交界面的低密度B細胞和大部分Percoll溶液。由于此時細胞沉淀非常松散,需留下約0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀細胞。輕敲離心管,用留下的液體懸浮高密度B細胞。
3.用洗滌液分別洗滌低密度B細胞和高密度B細胞兩次,每次離心500×g 10分鐘。最后,測定細胞數和細胞活力,用1~2ml含5%小牛血清的洗滌液將細胞配成適當濃度。