·請確保RPMI+1% FBS的pH值不要太高:DNA酶I在pH 7.0–7.4之間的效率最高(RPMI暴露于大氣環境中會導致pH值增加,pH指示劑會變紫)。
·請勿在DNA酶I的處理過程中使用RPMI+10% FCS。應用10%的FBS會比1%的FBS獲得的細胞得率更低(可能由于一些批次的FBS中含有的DNA酶I抑制因子)。
·請確保緩沖液中含有DNA酶活性所需的Mg2+/Ca2+。
·DNA酶I必須溫和處理。劇烈攪拌DNA酶溶液會降低酶活性。一定不要對DNA酶溶液進行渦旋操作。
·當回收較低數量的細胞時,我們推薦您使用RPMI+1% FBS培養基預先包被管體,以減少細胞的損失(細胞很粘,容易在分選過程中貼附于管壁上)。
·DNA酶I在20°C條件下具有良好活性,不過,我們推薦用戶在DNA酶I的處理步驟之前將RPMI+1% FBS預熱至37°C,因為不同實驗室的室溫并不相同。
·當細胞與DNA酶釋放緩沖液孵育后,在使用磁力架分離之前對磁珠-細胞混合物進行徹底的吹打非常重要,這樣可提供機械力打斷DNA連接。未仔細吹打細胞將會降低細胞的得率。