你按照買的反轉錄試劑盒來做就行.
（1）、從細胞中提取細胞總RNA
用GIBCO公司的Trizol試劑提取細胞總RNA.按試劑使用說明操作:離心收集細胞,傾去細胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107細胞),混勻至室溫5分鐘,用1 ml加樣器反復吹打,直至細胞完全裂解成均一溶液,不粘稠時為止.隨后加入200ul氯仿,劇烈振蕩15秒鐘,室溫放置5分鐘,然后,4 0C ,12000rpm離心5分鐘,將上層水相轉移至一Eppendorf管中,加入500ul異丙醇后混勻.4 0C , 1 5000rpm離心15分鐘,傾出異丙醇.用70%乙醇洗滌沉淀一次,置冰上,讓殘余乙醇揮發殆盡.溶于適量的DEPC水中,紫外分光儀測定RNA的純度及含量,分裝凍存于一700C保存.
（2）、反轉錄成cDNA第一鏈(參照產品說明)
在20ul體系中,加入1ug總RNA, 1 ul oligo dT12_l8 ( 500ug/ml ). RNase-Free水,70 0C溫育10分鐘后立即冰浴冷卻,繼續加入4ul 5 x Buffer, 2ul 0.1 M DTT, 1ul IOMm dNTPs ( IOMm/種),混勻后于42℃保溫2分鐘,加入1ul( 200U)的反轉錄酶,42℃繼續溫育50分鐘.700C 15分鐘滅活反轉錄酶.
（3）、 引物設計
(4)過程: 以1ulcDNA為模板,在50ul體系中含有Taq酶為2單位,dNTPs濃度為200uM,引物各為0.2uM.擴增22個循環.取8ul電泳.