揭開細胞復制的秘密

　　在發育和干細胞生物學、癌癥研究和藥物開發中，測定細胞的增殖能力是一種基本方法。Life Technologies推出了一系列產品，可高效準確地測定細胞在整個細胞周期中的進程。Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor為單個細胞或細胞群體中的細胞周期進程提供了準確、靈敏的讀數。而Click-iT? EdU assay則能檢測進入DNA合成期的細胞，并將S期的細胞與其他細胞區分開來。

　　研究細胞周期

　　Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor是基于兩個細胞周期調控蛋白geminin和Cdt1，它們分別與綠色和紅色熒光蛋白相融合。Cdt1和geminin蛋白的降解是時間上調控的，這樣G1期只存在Cdt1，G1/S期存在兩種蛋白，而S、G2和M期只存在geminin。因此，細胞核的熒光就從紅色(G1)變成綠色(S、 G2、M)，為監控細胞周期進程提供了一種簡單的方法。

　　FUCCI系統是基于BacMam 2.0技術，它利用桿狀病毒來實現哺乳動物細胞的高效轉導和瞬時表達。BacMam 2.0大大提高了這種基因導入平臺的效率和實用性。過去與BacMam 1.0不兼容的細胞類型(神經元)，或轉導效果不佳(一些干細胞、CHO)的細胞類型，現在也能通過簡單的一步過程定量轉導。BacMam 2.0融合了新元件，大大增強了轉導效率和表達水平，故性能改善。

　　Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor實現了細胞周期進程和細胞分裂的活細胞成像，它也與固定和透化處理兼容。這種細胞周期傳感器是即用型的，操作過程也很簡單——只需將 Premo? FUCCI試劑加入您的細胞，孵育過夜，并利用熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察即可。

　　追蹤DNA合成

　　Click-iT? EdU assay則是我們常用的BrdU分析的替代。在DNA合成過程中，核苷類似物EdU(5-乙炔-2’-脫氧尿苷)摻入新生的DNA鏈中。EdU不是通過抗體檢測，而是基于一個click反應——銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應。EdU核苷中含有炔烴，而Alexa Fluor或Pacific Blue熒光基團上含有疊氮化物。利用成像技術、流式細胞術或高內涵分析即可判定群體中S期細胞的比例。

　　Click-iT? EdU標記的一個主要優勢在于熒光疊氮化物(分子量<~1,000)的體積遠小于BrdU抗體(分子量~150,000)，這樣EdU可在溫和條件下摻入，保留了抗原完整性，從而實現了下游的抗體分析。與BrdU檢測需要苛刻條件不同，Click-iT?檢測試劑只需要標準的固定和透化即可。

　　Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor讓細胞周期分析可在活細胞中開展，它與延遲成像結合時特別有用。對于固定細胞的成像，Click-iT? EdU標記實現了溫和條件下摻入EdU的高效檢測。(生物通 余亮)