A的基本原理為：放射性同位素標記的抗原（簡稱“標記抗原”）和非標記抗原（標準抗原或待測抗原）同時與數量有限的特異性抗體之間發生競爭性結合（抗原－抗體反應）。由于標記抗原與待測抗原的免疫活性完全相同，對特異性抗體具有同樣的親和力，當標記抗原和抗體為數量恒定時，待測抗原和標記抗原的總量大于抗體上的有效結合點時，標記抗原-抗體復合物的形成將隨著待測抗原量的增加而減少，而非結合的或游離的標記抗原則隨著待測抗原數量的增加而增加（也就是所謂的競爭結合反應），因此測定標記抗原-抗體或標記抗原即可推出待測抗原的數量。