125I 標記化合物的制備方法可分為直接標記和間接標記兩類方法。
(1)直接標記法
最常用于肽類、蛋白質和酶的碘化標記,其原理是采用化學或酶促氧化反應直接將125I結合于被標記物分子中酪氨酸殘基或組胺殘基上。其特點是標記方法操作簡便,容易將較多的125I結合到被標記分子上,得到比放射性較高的標記物。但該法不適用于分子中不含前述可碘標記殘基的化合物或可碘化殘基位于被標記物的生物免疫活性功能域等情況。
(2)間接標記法
聯接標記(Bolton-Hunter)是最常用的間接碘標記方法。該法主要用于甾體類化合物等缺乏供碘標記部位的小分子化合物。該法避免了標記反應中的氧化/還原劑對待標記物免疫活性的損傷,尤其適用于對氧化敏感的肽類化合物,以及某些不含酪氨酸殘基的蛋白質(如半抗原)和酪氨酸殘基未暴露在分子表面化合物的標記。不足之處是標記物的添加基團可能影響被標記物的免疫活性。