放射自顯影原位雜交玻片的復染和壓片固定實驗

水化并顯影的原位雜交玻片

吉姆薩染色液（Fisher) 710 mmol L磷酸鈉緩沖液 pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀釋） 50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯 封片介質為Permount (Fisher)或 Gelvatol (現稱 Airvol 來自Air Productsand Chemicals)

玻璃染色盤 13個平頭鑷 Whatman 3 MM 濾紙條 42℃溫箱

1) 將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。

2) 在染色盤中，準備以下各組液體：

1個盤：用pH 6.8 10 mmol/L磷酸鈉緩沖液配制的25倍稀釋的吉姆薩染液；

3個盤：水。

脫水系列溶液（可重復使用）：

3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇；2個盤：盛有100%乙醇；

3個盤：盛有二甲苯。

3) 在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s (依染色時間決定染色的強弱）。將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4) 用乙醇系列溶液脫水，每盤中浸泡2 mm,將玻片移至二甲苯盤中，每次浸泡2 min,共 3 次。應注意進行脫水和在二甲苯中平衡的操作，因Permoimt不與水或乙醇相溶。

5) 在通風櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permmmt于另一端（切片所處位置），右手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上。在加壓片固定介質和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會造成入為假象。

如用Gelvatol，對切片無需進行脫水處理。例如，在免疫組化試驗中。以Gelvatol進行壓片固定 按如下進行：滴1小滴Gelvatol于蓋玻片上，小心將載玻片貼于液滴上，防止產生氣泡。避免施壓，否則可能壓壞樣本，室溫下放2?4 h使之凝固。

6) 用3 MM濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余封片介質/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。勿將玻片直立存放于玻片中，因此時封片介質尚未凝固。

7) 將玻片平放于一硬紙盤上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。

8) 以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳、染料和封片介質。用鏡頭紙或普通棉紙 擦去塵埃。放入玻片盒，必要時，在載玻片上再注明標簽。

9) 顯微鏡觀察玻片，觀察時可依信號強弱調節光亮。