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  • 圖 6 1ug C.elegans 蛋白胰酶酶解物在反相色譜分離的基峰圖,四級桿飛行時間質譜和 LTQ Velos 線性離子阱全掃描動態范圍的比較

    Q-TOF 掃描速率對靈敏度的影響

    如圖 7 所示,將 Q-TOF 掃描速率從 3Hz 升至 6Hz ,導致鑒定到肽段數目減少,這主要是因為隨著 Q-TOF 質譜儀的掃描速率提高,一級質譜圖特別是二級質譜圖質量下降。增加的掃描速度減少了離子的傳輸時間,由于較少的離子被檢測到和平均化,因此降低了譜圖的信噪比。如圖 8 所示,將 Q-TOF 掃描速率從 3Hz 升至 8Hz ,損失了 66% 的 Q-TOF 信號,在二級質譜圖可檢測到的特征離子數目減少了。

    增加的 MS/MS 采集的掃描速率,降低了二級質譜圖的質量和信噪比,而且 Mascot 鑒定到的肽段的得分也受影響,如圖 9 所示,二級質譜圖掃描幾乎來源于色譜峰的頂點。在高質量 Q-TOF3Hz 譜圖下, Mascot 得分為 49 分,而且 LTQ Velos 雙壓離子阱對于同一樣品,進樣量只有 Q-TOF80% 的時候, Mascot 的得分為 103 分,前者比后者低了 53% ,當 Q-TOF 在 6Hz 運行時,對于 1 μ g 的樣品在 180 分鐘的運行時間內,鑒定到的肽段數目下降了 40% ,這就是為什么盡管儀器的掃描速率可以達到 10Hz ,在做肽段鑒定實驗過程中,廠家不建議其采樣速率超過 3Hz 的原因。

    擁有ZL技術的 pAGC ,在阱內可實現離子累積, LTQ Velos 雙壓離子阱不管前體離子的峰強度,對于二級質譜的離子數目進行優化,結果顯示,在 180 分鐘的梯度內,在實際掃描速率為 6.3Hz 運行下的 LTQ Velos 雙壓離子阱比 6Hz 運行下的四級桿飛行時間質譜( Q-TOF )多檢測到了 282% 個特異性肽段。

    圖 7 1ug C.elegans 蛋白胰酶酶解物在 180 分鐘內用四級桿 - 飛行時間質譜儀( 3Hz 和 6Hz )和 LTQVelos 線性離子阱鑒定到特異性肽段數目的比較

    圖 8 在 Q-TOF 儀器上比較不同質譜掃描速率下信號的強度


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