全自動血細胞分析儀在每日大量標本檢測過程中,長達8h以上的工作時間,日常質量控制是非常重要的工作,除了要保證有一定的精密度外,還應保證其分析結果的準確度。為保證其正常運行和準確的測定,按ISO15189實驗室規定儀器在分析前、分析中、分析后、更換試劑、儀器故障維修后等出現變數的情況下均需插入做質控,用于監測儀器的穩定性。配套的質控品價格昂貴需預定且數量有限,實驗室多不可能做到多次插入質控品進行監測。儀器在測定過程中,偶然出現影響測定的各種故障和偶然因素,會導致偶然誤差甚至系統誤差。為解決此問題,我們使用正常新鮮血標本作為參考標本,用多次測定參考標本的方式監控儀器的工作狀態和判斷當日測定結果的穩定性。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1設備日本SYSMEX公司XE-2100型血細胞分析儀。
1.1.2試劑采用儀器原裝進口配套試劑、校準品和質控物。
1.1.3器材廣州陽普醫療科技有限公司提供的真空紫頭采血管乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)和真空采血器。
1.2方法
1.2.1 參考標本的選擇健康體檢者靜脈采血5mL用(EDTA -K2)抗凝,30min內測定結果,選擇結果與配套的質控品結果相近的新鮮全血標本作為正常參考標本。
1.2.2用四種不同方式進行測試(1)方式一:每測30份病人標本插入1份正常參考標本和配套的質控品(以批號QC- 91730802質控品為例),共10次,觀察儀器的精密度和重復性。(2)方式二:10份參考標本取血后10min,各連續測定6次,觀察儀器在短時間內連續測定時血細胞的穩定性和最大連續性;(3)方式三:取10份參考標本,每份標本立即測定3次,室溫放置8h后再測定3次,觀察儀器在沒有過多的干擾和取樣情況下血細胞變化;(4)方式四:取10份血分別在采血后即刻1、2、4、6、和8h各測定1次,用以觀察時間的延長、反復混勻和反復取樣,以及標本量的不斷減少,對血細胞可能產生的影響。
1.2.3按全自動血細胞分析儀操作規程規定,在分析前和分析中選配套的質控品進行質量控制并繪制Levey-Jennings質控圖,監測儀器的工作狀態,保證儀器當日的精密度和穩定性。
1.2.4統計學方法采用SPSS11.0統計學軟件分析,數據以(χ±s)表示,組間比較采用t檢驗。
2結果
2.1方式一正常參考標本和SYSMEX配套質控品的均值、標準差和變異系數(表1)
由于XE-2100血細胞分析儀性能穩定,重復性好,變異系數允許范圍在WBC≤3.00,RBC≤1.50,HB≤1.0,HCT≤1.5,PLT≤4.0之內;所以儀器配套質控品和正常參考標本的CV值均小于3%,見表1。用定值的新鮮血標本作為質控監測物,結果均優于配套質控物。說明新鮮全血在室溫條件下WBC、RBC、HB、HCT、PLT 8h內多次測定的結果非常穩定。
2.2不同檢測方式中每份標本最大標準差和最大變異系數
從表2實驗數據表明四種檢測方式中方式二SD,CV值均低于其他三種方式,結果重復性好,精密度高。方式三和四中產生偏差較大的項目為血小板和白細胞,這可能與時間的延長、標本反復混勻、反復取樣、樣品量的減少、樣品自身穩定性等因素有關,但均在可接受范圍內。各方式之間比較無顯著性差異(P>0.05)。
3討論
當前血液細胞分析儀多采用隨機配套的全血質控物,由于配套校準物質成本高、有效期短等多種原因,難以得到普遍推廣[1]。如果采用隨機多次測定法,會給科室帶來較大經濟負擔。為了解決此問題通過使用相對穩定的新鮮血作為參考標本,部分代替全血質控物來觀察每日在各個時間段的工作情況,對儀器和試劑在更多的時間點上進行監測,從而達到保證全程質量控制和隨機質量控制的目的。
用定值的新鮮全血標本作為質控監測物,其穩定性一般在室溫18～25℃的條件下,8h內保持穩定[2]。四種檢測方式中參考標本在室溫條件下WBC、RBC、HB、HCT、PLT在8h內多次測定的結果非常穩定,偏差很小,重復性好,各參數變化幅度均不大,結果均優于配套質控物。方式一和方式四中各項指標可能隨時間的延長,標本反復混勻、反復取樣、標本量減少出現大小不等的變化;方式二中的實驗數據表明,即刻測定對標本的穩定性影響最小,偏差也小,各參數變化幅度不大;方式一,方式三和方式四中的紅細胞、血紅蛋白及其參數比較穩定,這與紅細胞本身比較穩定有關;白細胞會出現略微減低的現象,可能與外周血中白細胞壽命短暫、自然破壞損失有關。表2中參考標本各個項目與SYSMEX配套質控(以批號QC-91730802質控物以例)比較,前者顯示了更好的精密度和穩定性,這可能與配套質控物需要保存更長時間應付反復取樣和4℃低溫條件保存等復雜環境,其浮動較大有關;各方式之間比較無顯著性差異(P>0.05)。本試驗缺陷是沒有進行高值和低值的測定比較,還有待于以后探討。
利用新鮮血對血液分析儀進行關于室內質控[3]、儀器校準[4-6]和比對[7]已有大量的應用文獻報道。但是用在實時監控血細胞分析儀日常的常規工作中,通過此種方式進行室內質量控制的方法,很少報道。我們通過選擇一份新鮮定值全血參考標本,多次、并在多個時間段上連續測定,對血細胞分析儀進行實時監控。這樣可省卻應用大量配套質控物所造成的檢驗成本上升和質控物浪費問題,是一個可行的室內、日內質量控制方法,可以間接證明儀器在當日每個測定時段都保持著很好的精密度和穩定性。從而及時發現失控問題,及時糾正失控原因,大大提高檢驗報告的可靠性和有效性,為臨床診斷提高更準確的指標。因此,建立新鮮全血參考標本作為日內監控血細胞分析儀的工作狀態的方案是行之有效的。