時間分辨熒光免疫分析（Timeresolved
Fluoroimmunoassay,TRFIA）是一種非同位素免疫分析技術，它用鑭系元素標記抗原或抗體，根據鑭系元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數進行信號分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。
解離增強鑭系元素熒光免疫分析
解離增強鑭系元素熒光免疫分析（Dissociation Enhanced Lanthanide
FluoroimmunoassayDELFIA）是時間分辨熒光免疫分析中的一種。它用具有雙功能基團結構的螯合劑，使其一端與銪（Eu）連接，另一端與抗體/抗原分子上的自由氨基連接，形成EU標記的抗體/抗原，經過免疫反應之后生成免疫復合物。由于這種復合物在水中的熒光強度非常弱，因此加入一種增強劑，使Eu3+從復合物上解離下來，自由Eu3+同增強劑中的另一種螯合劑螯合形成一種膠態分子團，這種分子團在紫外光的激發下能發出很強的熒光，信號增強了百萬倍。因為這種分析方法使用了解離增強步驟，因此稱為解離增強鑭系元素熒光免疫分析。
兩對半定量測定
乙肝病毒（HBV）標記物的檢測方法常用測定乙肝病毒的抗原、抗體標記物，由60年代末70年代初的瓊脂擴撒法，依次發展為血凝法→酶聯免疫吸附（ELISA）、同位素免疫標記（RIA）→化學發光免疫分析、生物發光、電化學發光免疫標記和80年代中建立的稀土離子熒光標記（時間分辨熒光免疫分析
）等不同的檢測方法。隨著科學的發展和檢驗技術的進步，其方法每發展一步，乙肝標記物檢出的靈敏度和準確性都得到不同的提高（其中RIA為
10-12mol/L、ELISA為10-9mol/L、CLIA為10-15mol/L、ECL10為-17/L、TRF為10-18mol/L）。其中時間分辨熒光免疫分析（TRF）為近年新研制成功的用三價稀土離子作為示蹤物，以單克隆抗體包被支持物與樣品中抗原反應，再加入用銪（EU）標記的抗體，進行反應檢測，可大大降低一般同位素和熒光標記受環境干擾缺點，提高了檢測的靈敏度和準性，該TRF法檢測乙肝病毒標記物較其他方法靈敏度高、特異性好，因干擾因素少可大地優于以上各種方法，可與HBV-DNA的檢測相比(未經規范化要求開展的HBV-DNA檢測，多年的臨床實驗證明，假陽性、假陰性率較高，重復性差，且不能定量。TRF為目前檢測乙肝病毒標記物最理想的方法。TRF定量檢測乙肝病毒“兩對半”為臨床診斷乙肝提供了新手段，有助于臨床客觀的分析HBV感染情況、療效的觀察和轉歸等情況的分析，至少可對下列情況更具有獨特的診斷價值：
（1）治療前進行病毒定量檢測，可以指導選擇抗病毒藥物，避免盲目用藥。
（2）治療后定量間接判斷體內病毒數量，有助于療效的觀察。
（3）懷孕前進行定量測定，有助于選擇有利的懷孕時機。乙肝孕婦進行定量檢查，有助于使部分病人得到及時的正確的診斷。
時間分辨熒光免疫定量測定乙肝兩對半的臨床意義
目前我科已正式開展了乙肝二對半的TRFIA定量分析，其每一項的正常值范圍均是由我國衛生部根據美國雅培的標準而制定，其靈敏度，準確度，及精確度都有遠遠優于一般的ELISA法，乙肝兩對半的定量制定將給臨床提供一個關于乙肝診斷及療效，預后判斷的更可靠的實驗結果。
1、極大地提高了檢測的靈敏度
時間分辨熒光免疫定量技術（TRFIA）檢測HbsAg靈敏度可達0.2ng/ml，而酶標（EIASA）檢測的靈敏度是2ng/ml，極大地提高檢測的靈敏度。因此，在急性乙肝早期能及早檢出HbsAg，確證HBV感染，縮短窗口期；其次，可發現低濃度HbsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對HBV包膜蛋白的免疫應答，HbsAg表達較低，酶標檢測可出現HbsAg和
HbsAb均陰性的情況，TRF技術則可避免這些情況的發生，為正確判斷病情提供依據。
2、能動態觀察療效和監測病情
（1）定量分析HBsAg和
HBsAb的濃度變化，可預見急性乙肝是否處于恢復期。如HBsAg濃度降低，HBsAb濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復期發展；反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢，而HBsAb一直處于較低水平，則易發展為慢性乙肝或病毒攜帶者。
（2）定量分析HBeAg和HBeAb的濃度變化，可反映病情變化和治療效果。定量測定能明確檢測HBeAg向HBeAb轉換的時期，即表現為
HBeAg濃度下降和HbeAb升高的過程。高濃度的HBeAg還可間接提示病毒處于高復制狀態，具有較高的傳染性。高濃度的HBeAb一方面提示病情好轉，而在某些時候（如肝功能指標很差）則可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關。
（3）HBcAb濃度的高低可反映病毒感染的狀態。高濃度的抗-Hbc提示乙肝急性感染，恢復期濃度降低。慢性乙肝呈抗-Hbc持續高濃度。而低濃度的抗-Hbc一般為恢復期或既往感染。
（4）有利于對慢性肝炎活動性或非活動性的判斷。非活動性慢性乙肝各項指標相對穩定，活動性往往呈現進行性變化。
3、TRFIA和定量PCR技術可互相補充
血清HBV—DNA熒光定量PCR測定可以直接反映血液中病毒復制狀態，具有很多臨床應用價值，但不能完全反映病毒復制靜息期肝細胞內HBV病毒狀態。HBV—DNA陰性并不完全代表體內HBV已被清除，結合“兩對半”各項指標更能客觀反映體內HBV病毒狀態。
4、HbsAb的定量測定能夠對乙肝的預防起到監督作用
HbsAb的定量測定能夠對抗體是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正確評價，對乙肝的預防起到監督作用。HbsAb的含量在10mlU/ml
以上病人ELISA檢測即可呈陽性結果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而HBsAb
的含量在10—100mlU/ml之間的樣本，定性雖為“陽性”，但此時機體對HBV的免疫力較弱，甚至不能預防HBV感染。只有HbsAb的含量達到
100mlU/ml以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量檢測，可根據HBsAb
的含量判斷機體對HBV的免疫狀態及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預防乙肝方面