實驗概要
本試驗利用新近引入的國外冷凍切片機和顯微攝像系統，開展對昆蟲體內酵母類共生菌的形態學研究，以明確該類共生菌的個體形態特征以及在寄主蟲體內的存在狀態。
主要試劑
1. 樣品包埋劑選用Leica CM1900 冷凍切片機配套包埋劑(OCT-compound)
2. 結晶紫，組織染色選用常規染色劑
3. 二甲苯(進行組織切片的脫水和透明處理)
4. 香柏油(油鏡觀察用)
主要設備
1. Leica CM1900 冷凍切片機(Leica Microsystems Nussloch GmbH， German) 切片厚度范圍為0～50μm ，箱體最低控制溫度為-40 ℃，切片頭最低控制溫度為- 50 ℃
2. Leica S8 APO 連續變倍實體顯微鏡(Leica Opti-tech Scientific Inc.， Ger rman) 物鏡配置為0.63 ×、1 ×、2 ×，目鏡配置為10 ×和25 ×，變倍系數為0～8.0
3. Leica DMLS2 正置生物顯微鏡(Leica Opti -tech Scientific Inc.， Ger rman ) 。物鏡配置為5 ×、10 ×、20 ×、40 ×和100 × (油鏡) ，目鏡配置為10 ×和25 ×
4. Leica DFC320 數碼攝像系統(Leica Opti-tech Scientific Inc. ， Ger rman) ，分辨率3 300 000像素。可與Leica S8 APO 連續變倍實體顯微鏡和Leica DMLS2 正置生物顯微鏡配套，利用IPP 軟件( Image-Pro Plus version 410； Media Cybernetics， Inc. Georgia Avenue Silver Sp ring， MD，USA) 進行組織冷凍切片的顯微攝像
5. 載玻片(若干)
6. 吸水紙
7. 擦鏡紙
實驗材料
褐飛虱雌成蟲，長期在感蟲品種水稻上連續繼代飼養的實驗種群。
實驗步驟
1. 冷凍切片
(1) 從供試的褐飛虱實驗種群中隨機采集懷卵的雌成蟲(以腹部膨大為準) 300 頭，置于- 20 ℃冰箱中備用。
(2) 每次隨機取10 頭成蟲，解剖鏡(Leica S8 APO； Leica Opti-tech Scientific Inc. ， Ger rman) 下分別取頭部、胸部和腹部進行冷凍切片。冷凍切片厚度為5～7μm，冷凍切片機箱體溫度設置為- 30 ℃，切片頭溫度設置為- 40 ℃。
(3) 樣品放于切片托(直徑30 mm) 上，置于冷凍切片機樣品架上預冷30 min后切片。組織切片自然粘貼于載玻片上，每張載玻片上放置20～30 個樣本切片用于顯微觀察。
2. 結晶紫染色
(1) 每張粘貼有蟲體組織切片的載玻片在酒精燈上加熱固定5 s；
(2) 二甲苯脫水；
(3) 透明處理2～3 h；
(4) 再次加熱固定5 s后用結晶紫染色3～5 min；
(5) 自來水沖洗10 min后吸水紙吸水、風干；
(6) 玻片風干后在顯微鏡下觀察、拍照，以明確褐飛虱蟲體內酵母類共生菌的形態特征和存在部位。