昆蟲細胞轉染實驗

昆蟲細胞

胎牛血清 脂質體轉染劑

培養皿 錐形瓶 培養箱 離心機 轉子

1.  接種2x10⁶個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。

2.  相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40 ul 無菌水，加入一支無菌聚苯乙烯管中，加入5 ul 線性化的AcMNPV DNA和5 ul  100 ng/ul 的質粒DNA。將Lipofectin 充分混勻后，往DNA溶液中加入50 ul，輕柔混勻，于室溫溫育15 min。

3.  在15 min 的溫育期間，用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培養液代替培養皿中的培奍液。

4.  往培養皿中遂滴加入Lipofectin-DNA復合物，同時輕柔旋轉平皿加以混勻。于27℃溫育4~5 h。

5.  往每個培養皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培養液（或含有5%胎牛血清的無血清培養液），在27℃加濕培養箱中溫育60~72 h。

6.  從每個堉養皿中將轉染上清（由培養液和病毒組成）轉移至無菌的15 ml 錐形離心管中4℃ 1 000 g 離心10 min。將病毒上清轉移至新的滅菌試管，4℃避光保存備用。