普瑞邦伏馬毒素檢測方案介紹
（一） 免疫親和柱-高效液相色譜法：符合GBT 25228-2010 糧油檢驗 玉米及其制品中伏馬毒素含量測定 免疫親和柱凈化高效液相色譜法
Pribolab?（普瑞邦）應用免疫親和柱凈化，利用高效液相色譜儀和熒光檢測器檢測可提供伏馬毒素測定的HPLC檢測方案，得出的結果準確可靠，檢出限好，是一種很好的檢測伏馬毒素的方法，僅供廣大用戶參考。
1. 設備和耗材配置
序號 | 品名 | 規格及參數 | 數量 | 用途 |
1 | 高效液相色譜儀 | 一臺 | 分析檢測 | |
2 | 熒光檢測器 | 一臺 | 讀取熒光信號 | |
3 | Pribolab真菌毒素專用色譜柱 | 150/250mm 貨號：PRC-18 | 一支 | 配套各類色譜儀，霉菌毒素檢測用 |
4 | PriboFast?伏馬毒素免疫親和柱 | 3ml，25支/盒， 貨號：IAC-050-3 | 若干 | 高特異性，純化樣本 |
5 | 高速均質器 | 達到22000rpm 以上，貨號：EQ-WR-1L | 一臺 | 耐腐蝕，高速，均質 |
6 | PriboFast?玻璃纖維濾紙 | 100P,110mm，1.5μm 貨號：GMF-110 | 一盒 | 霉菌毒素專用過濾 |
7 | PriboFast?八位泵流操作架 | 貨號：EQ-PUMP-8 | 一臺 | 用于控制免疫親和柱過柱流速 |
8 | 伏馬毒素標準品 | 50μg/ml伏馬毒素B1, 50μg/ml伏馬毒素B2溶于乙腈/水（50/50）, 貨號：STD#2011 | 1ml | 用于定量分析標準品的配制 |
2. 樣品前處理:普瑞邦為飼料提供不同的處理方案(詳細方案請聯系普瑞邦，普瑞邦開發了針對多種飼料基質提供優化的處理方案)
樣品處理：
花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料
----將50 g 研磨的樣品 + 5g鹽置于均質杯中。
----加入100mL 甲醇：水（80：20）溶液。
----蓋上杯蓋，高速均質5分鐘。
----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；
----取10mL濾液并加入40mL PBS溶液將濾液稀釋，混勻。用玻璃微纖維濾紙過濾，取稀釋后液體待測；
----將上步稀釋液通過微纖維濾紙過濾，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL。
3. 免疫親和柱凈化:
操作程序：符合GB/T 25228-2010國標方法
----將免疫親和柱連接于泵流操作架的10mL注射器下。準確移取10mL樣品提取液注入注射器；
----富集:將空氣壓力泵與注射器連接，調節壓力使提取液以約2-3mL/min(1滴/3秒)流速緩慢通過免疫親和柱，直至2-3mL空氣通過柱體；
----洗滌: 用10mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2-3mL空氣通過柱體；
----洗脫可采取以下方式之一進行: 優選2
----洗脫1: 準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡),然后以流速為1-2mL/min過柱，收集全部洗脫液供檢測用。
----洗脫2: 為保證洗脫充分,建議以1.5mL色譜甲醇分兩步進行洗脫，流速為1-2mL/min(1滴/秒,重力即可) 。首先，加入0.5ml甲醇洗脫，重力過柱，當溶劑通過柱子后，等待30秒后再加入1ml甲醇進行洗脫，過柱前孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡)。收集全部甲醇洗脫液供衍生化反應用。
4. 衍生化反應
分別取凈化后的樣本液和標準工作溶液各50ul，分別置于1ml的各個試管中，各加入50ul OPA衍生液，渦流混合器上混合30s，靜置3min后，立即取20ul衍生液進高效液相色譜儀分析。
5. 高效液相色譜分析
HPLC-色譜柱 ：C-18色譜柱 150 x 4.6 mm;
流 動 相 ：甲醇-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液 77:23
流 速 ： 1 mL/min
柱 溫 ： 室溫
進 樣 體 積 ： 20μL
熒光檢測器：λ-激發波長：335nm λ-發射波長：440 nm
HPLC配置：高效液相色譜儀帶有熒光檢測器
溫馨TIPS：
1. 谷物、飼料中真菌生長繁殖的有利條件主要是適宜的溫度與水分。如能將谷物、飼料等貯存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。
2. 從事真菌毒素科研及檢測的人員，必須注意防護，如穿戴隔離衣帽，在進行真菌分離培養工作時，應戴口罩，并盡量防止孢子飛揚。
3. 操作臺面如有漏濺，應立即用新配的5％次氯酸鈉消毒。以5％次氯酸鈉（NaOCl）處理時，黃曲霉毒素于數秒鐘內即被破壞，故是常用的消毒劑。
4. 也有應用生物學方法解毒的報道，生物學方法成本低，收效大，可能是一種有前途的除毒措施。
鑒于霉菌毒素對人體的危害，提醒各位奮斗在抗毒一線的老師們一定要注意保護自身安全哦！