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  • 發布時間:2020-08-24 16:44 原文鏈接: 普瑞邦飼料中真菌毒素檢測的解決方案

      一、 伏馬毒素起因和特性

      伏馬毒素主要是由串珠鐮刀菌菌f.moniliforme和f.proliferatum在一定溫度和濕度條件下繁殖所產生的次級代謝產物。到目前為止,發現的伏馬菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11種。糧食在加工、貯存、運輸過程中易受上述兩種真菌污染,特別是當溫度適宜時,更利于其生長繁殖,從而產生出一類結構性質相似的毒素,其中FB1是其主要組分占60%以上,其毒性也最強。因此,伏馬毒素可以通過糧食加工、飼料生產等過程對畜牧業乃至人類健康產生較嚴重的危害。

      FB1對食品污染的情況在世界范圍內普遍存在,主要污染玉米及玉米制品,其污染的飼料主要為以玉米為原料的飼料。1996年我國對玉米、小麥等糧食作物中FB1污染進行調查。發現不同地區均有不同程度污染。我國食道癌高發區林縣的玉米伏馬菌素污染率為48%。因此,人們懷疑該地區食道癌高發與食用污染此毒素玉米相關。該毒素已被世界衛生組織列為近年來首先進行研究的幾種霉菌毒素之一。

      二、 伏馬毒素的危害

      1.馬大腦白質軟化癥

      這是一種馬的神經失調疾病。根據1988年南非研究人員的試驗結果,每天以0.125mg/kg體重的水平給馬進行皮下注射,大約7天后馬開始發瘋、發狂,沖撞欄桿而死。解剖發現馬的大腦呈現白質軟化癥狀。1989年,玉米中的伏馬毒素給美國有很多州的農業和畜牧業造成了巨大的損失。

      2.豬肺水腫

      1992年和1994年美國和南非的科學家研究表明,每天伏馬毒素的攝取量在0.4mg/kg體重以上均可引發豬的肺水腫,還可造成豬生殖系統的紊亂,如早產、流產、死胎和發情周期異常等。這種病在美國及其他國家都有發現。

      3.小鼠肝癌

      1991年南非科研人員對小鼠進行了伏馬毒素的毒理試驗,試驗結果表明伏馬毒素引發肝癌。1998年又對大鼠進行了伏馬毒素毒理試驗,獲得相同的結果。

      4.人類食道癌

      早在1988年南非科學家就對食道癌發病率高和低的地區進行過調查,食道癌發病率與主食玉米受伏馬毒素污染呈正相關,進一步的動物試驗也得到了相同的結果。1994年中國學者和日本學者對食道癌高發區的河南省林縣進行了一次調查,發現該地區主食玉米中伏馬毒素水平高達30~50mg/kg,發霉玉米中伏馬毒素最高值達118.4mg/kg。目前伏馬毒素引發食道癌的機理還不清楚,需進一步確證和研究。

      三、 各國對伏馬毒素的限量標準

      2001年美國食品與藥物管理局(FDA)發布了供人類食用的玉米和玉米產品伏馬毒素最高限量指導性公告,規定人類食用玉米中伏馬毒素最高限量為2mg/kg;同時,FDA的畜牧醫學中心(CVM)也發布了動物飼料中伏馬毒素的最高限量指導性公告,規定其限量范圍為1~50mg/kg。

      表2 FDA對伏馬毒素在動物飼料中的推薦限量標準(2000年6月)

       玉米及其副產品用于下列動物飼料

       推薦限量標準(FB1+FB2+FB3),mg/kg

       馬和兔

       5ppm(不超過日食量的20%)*

       豬和鯰魚

       20ppm(不超過日食量的20%)*

       產子的反芻動物、家禽、貂

       30ppm(不超過日食量的20%)*

       大于3月用于屠宰的反芻動物、用于制作裘皮的貂

       60ppm(不超過日食量的20%)*

       用于屠宰的家禽

       100ppm(不超過日食量的20%)*

       其他各種牲口和寵物

       10ppm(不超過日食量的20%)*

       *以干基作為計算基準

      四、 伏馬毒素的檢測

      免疫親和柱+熒光儀檢測法和HPLC法。

      符合國標GBT 25228-2010 糧油檢驗 玉米及其制品中伏馬毒素含量測定 免疫親和柱凈化高效液相色譜法和熒光光度法。

      五、 普瑞邦伏馬毒素檢測方案介紹

      (一) 免疫親和柱-高效液相色譜法:

      Pribolab?(普瑞邦)應用免疫親和柱凈化,利用高效液相色譜儀和熒光檢測器檢測可提供伏馬毒素測定的HPLC檢測方案,得出的結果準確可靠,檢出限好,是一種很好的檢測伏馬毒素的方法。

      1. 設備和耗材配置

      序號

      品名

      規格及參數

      1

      高效液相色譜儀及熒光檢測器

      2

      Pribolab真菌毒素專用色譜柱

      150/250mm貨號:PRC-18

      3

      PriboFast?伏馬毒素免疫親和柱

      3ml,25支/盒,貨號:IAC-050-3

      4

      高速均質器

      達到22000rpm 以上

      5

      PriboFast?玻璃纖維濾紙

      100P,110mm,1.5μm 貨號:GMF-110

      6

      PriboFast?八位泵流操作架

      貨號:EQ-PUMP-8

      7

      伏馬毒素標準品

      固體或液體都可

      8

      衍生化試劑

      2-巰基乙醇MCH2-Mercaptoethanol

      鄰苯二甲醛

      2. 樣品前處理:普瑞邦針對食品飼料提供不同的處理方案

      花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料

      ----將50 g 研磨的樣品 + 5g鹽置于均質杯中。

      ----加入100mL 甲醇:水(80:20)溶液。

      ----蓋上杯蓋,高速均質5分鐘。

      ----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾;

      ----取10mL濾液并加入40mL PBS溶液將濾液稀釋,混勻。

      ,用玻璃微纖維濾紙過濾,取稀釋后液體待測;

      ----將上步稀釋液通過微纖維濾紙過濾,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL。

      3. 免疫親和柱凈化: 富集--洗滌--洗脫--收集全部洗脫液供化學衍生檢測用。

      4. 衍生化反應

      使用鄰苯二甲醛OPA和2-硫基乙醇MCE混合液對上述凈化樣品進行衍生化反應后迅速進樣.

      5. 高效液相色譜分析

      HPLC-色譜柱 :C-18色譜柱 150 x 4.6 mm;

      流 動 相 :甲醇-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液 77:23

      流 速 : 1 mL/min

      柱 溫 : 室溫

      進 樣 體 積 : 20μL

      熒光檢測器:λ-激發波長:335nm λ-發射波長:440 nm

      HPLC配置:高效液相色譜儀帶有熒光檢測器

      六、 溫馨TIPS:

      1. 谷物、飼料中真菌生長繁殖的有利條件主要是適宜的溫度與水分。如能將谷物、飼料等貯存于10℃以下,水分保持在10%以下,就能有效地防霉。

      2. 從事真菌毒素科研及檢測的人員,必須注意防護,如穿戴隔離衣帽,在進行真菌分離培養工作時,應戴口罩,并盡量防止孢子飛揚。

      3. 操作臺面如有漏濺,應立即用新配的5%次氯酸鈉消毒。以5%次氯酸鈉(NaOCl)處理時,黃曲霉毒素于數秒鐘內即被破壞,故是常用的消毒劑。

      4. 也有應用生物學方法解毒的報道,生物學方法成本低,收效大,可能是一種有前途的除毒措施。

      鑒于霉菌毒素對人體的危害,提醒各位奮斗在抗毒一線的老師們一定要注意保護自身安全哦!


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