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  • 發布時間:2020-09-01 11:12 原文鏈接: 晶狀體細胞培養特點和生長曲線

    晶狀體是一個雙凸透鏡狀富于彈性的透明體。位于虹膜、瞳孔之后,玻璃體之前,借晶狀體懸韌帶與睫狀體聯系。晶狀體后表面的凸度大于前面,是重要的屈光間質之一。晶狀體囊膜是在胎生期內有晶狀體上皮細胞分泌的具有基底性質的膠原彈性膜,是一層無細胞的透明薄膜,完整地包繞在晶狀體周圍。前囊膜下一層立方晶狀體上皮細胞分布從中央到赤道部附近,能不斷分裂增殖推向赤道部,在赤道部逐漸延長,最后變成晶狀體纖維。晶狀體纖維是構成晶狀體的主要成分。

    1、組織塊培養

    在無菌條件下在超凈臺中切開眼球,經后部取出晶狀體,仔細截取晶狀體前囊,將前囊皮剪成1mmx37℃的CO2培養箱內孵育,12-24h,當囊膜片及散落的晶狀體上皮細胞貼壁后,加入含有10%胎牛血清的DMEM培養基,隨后根據細胞的生長速度每3-4天換液一次。原代培養的細胞在培養瓶底長滿融合后,用0.02%EDTA+0.25%胰酶消化后傳代,以1:2或1:3的分種率傳代。培養基為含200x103U/L、鏈霉素250mg/L及含20%胎牛血清的DMEM培養基。

    2、晶狀體細胞的生長特點

    原代培養的晶狀體上皮在接種后2-3天即可見植片邊緣有新生的晶狀體上皮細胞。這些新生細胞呈六邊形或多角形鑲嵌排列,圍繞植片形成貼壁生長的單層細胞。細胞在接種2-3周后生長滿融合即可傳代。傳代的細胞一般24h貼壁,1-2周長滿融合成緊密排列的單層上皮細胞。

    在細胞增殖的早期,植塊周圍的晶狀體上皮細胞呈拉長的梭形,隨著細胞數目增多,密度增加,梭形細胞變為多邊形,而在增殖帶的外圍。細胞以及較大,形態不規則且排列比較稀疏。中央區晶狀體前囊膜、赤道前區晶狀體前囊膜、赤道區晶狀體前囊膜3個上皮細胞在培養后其形態特征無明顯差異。

    3、新生小牛、兔晶狀體上皮細胞特點

    在24-48h有上皮細胞自囊膜片生長移出。培養的小牛、兔晶狀體上皮細胞約需6-10天發生融合長滿瓶底。經消化后按1:2傳代的小牛、兔晶狀體上皮細胞生長迅速,約3-4天細胞可達融合,融合后的細胞呈多角形、橢圓形,大小基本一致。傳代第3代,小牛兔晶狀體上皮細胞雖生長迅速,但部分細胞形態已呈現出梭形的成纖維細胞的外觀,至第5代大部分細胞形態都發生了如此改變,胞內可見網狀結構,第6-7代時,細胞生長緩慢,胞內網狀結構增多,出現空泡樣改變。第8代時,生長特別緩慢,胞內網狀結構及空泡樣改變明顯增多。

    4、胎兒、成人晶狀體上皮細胞生長特點

    胎兒在24-48h就有上皮細胞自囊膜片生長移出,而成人在40-72h才可見有細胞子囊膜片生長移出,外觀呈芽孢狀,近囊膜片處細胞生長密集,呈多角形。遠離囊膜片處細胞生長稀疏,胞體延伸。培養的胎兒晶狀體上皮細胞約需9-12天發生融合長滿瓶底,成人約需11-14天;傳代的胎兒晶狀體上皮細胞生長稍有所緩慢,約6-8天細胞發生融合,不同年齡的人晶狀體上皮細胞生長更加緩慢,但形態一致,約需7-14天細胞才達到融合。胎兒和不同年齡人晶狀體上皮細胞傳代至第4代才可見細胞梭形改變,在第6-7代胞內也可見有網狀結構及空泡樣改變,第8代時,細胞發生衰老。

    5、胎兒晶狀體上皮細胞原代長期培養觀察

    原代胎兒晶狀體上皮細胞約經10天培養后發生融合,不給于消化傳代,每隔2-3天換液一次繼續培養,細胞生長逐漸密集,呈現復層樣生長,培養至6周時可見有細胞呈同心圓環繞的小球狀結構的形成,小球體內無細胞成分,Gimsa染色呈粉紅外觀。

    6、晶狀體上皮細胞生長曲線

    根據對小牛、兔、胎兒第2代不同培養時間的細胞計數,繪制出各自的生長曲線,并求出各自的細胞倍增時間,分別為24h、24.5h、26h;第2代3種不同年齡人晶狀體上皮細胞各自的細胞倍增時間分別為29h、32h、33.5h。人晶狀體上皮細胞供體的年齡與細胞倍增時間兩者之間呈負相關,其相關系數r=-0.996


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