暗場觀察時不能使用油浸系或水浸系物鏡，而用干燥系物鏡中鏡口率在0.85以下的物鏡。假如使用鏡口率過大的物鏡時，除微粒子反射的光束以外的旁射光束也可進入物鏡前透鏡.就是這種放大率并不大的物鏡下，可以達到觀察亞微粒子的要求。Zeiss公司出售的帶有孔欄的物鏡最適合于此種用途。具體操作如下。
1.安裝暗場聚光器檢查聚光器的光軸(并非晶體光軸而指幾何光學光軸)是否與顯微鏡的光路一致。聚光鏡用中心調節旋鈕合軸調整之后，圈錐光束的交點集中到標本平面上。
2.放標本放置標本時在聚光鏡前透鏡與載物片之間必須浸油。否則來自標本細節的反射光和衍射光束在載物玻片表面進行全反射。觀察結果趨于失敗。
3.調節聚光鏡焦點操縱光源會聚透鏡務使圓錐形光束的交點照射到標本平面上。
4.迭擇物鏡用于暗場觀察的物鏡中.油浸系或水浸系的物鏡不能使用。就是干燥系物鏡中也要挑選鏡率在0.85以下為好。Zeiss廠出售的本身帶有可調光欄的物鏡最為適用。如果物鏡鏡口率過大時，來自聚光鏡的部分直射光束進入物鏡前透鏡，從而干擾暗視野成像效應。如果使用油浸系物鏡觀察時，必須調節物鏡內裝孔徑光欄。
5.光派的選擇暗場顯微鏡中光能損失太大。因此必須選擇光強最大的光源，才能取得較好效果。尤其以超聚光鏡觀察膠體微粒運動時，光強愈大愈好.
6.浸油的方法 聚光鏡與載玻片間浸油時特別注意是否有氣泡。氣泡可招致暗視野觀察效果的完全破壞。