最新應用：螺旋藻中多環芳烴的檢測

　　前言

　　螺旋藻又名藍藻，因其富含優質蛋白質、多種維生素及生物活性物質，正日益受到人們的廣泛重視。但是近年來我國出口到歐盟的螺旋藻及其相關產品由于多環芳烴超標問題遭遇多次通報，而目前國家還沒有制定關于螺旋藻中多環芳烴檢測的標準方法，因此，建立測定螺旋藻中多環芳烴的方法具有重要的意義。本文參考海洋生物體中多環芳烴的提取方法，建立了由高效溶劑萃取、凝膠凈化和氣質聯用檢測的整體螺旋藻多環芳烴的提取檢測方法。實 驗結果顯示，對于客戶要求的?(CHR)、苯并(a)蒽(BaA)和苯并(b)熒蒽(BbF)這三種多環芳烴 的加標回收率在 84.4~117.3%之間。

　　1.試劑和設備

　　1.1 試劑 色譜純溶劑：正己烷，二氯甲烷，環己烷 ，乙酸乙酯

　　?硅藻土，200 目，AR：使用前在 300℃下烘烤 2h

　　弗羅里硅土，200 目，AR：使用前在 300℃下烘烤 2h

　　多環芳烴混合標樣，10ppm

　　1.2 設備

　　 HPSE 高效溶劑萃取儀，萊伯泰科北京公司；

　　 GStation-G 全自動凝膠凈化系統，萊伯泰科美國公司；

　　 M8 平行濃縮儀，萊伯泰科北京公司；

　　 GC/MS 氣相色譜質譜聯用儀

　　2. 實驗過程

　　2.1 樣品萃取

　　? 分別稱取 2g 螺旋藻粉末，3g 硅藻土和 5g 弗洛里硅土。把 2g 螺旋藻粉末和 3g 硅藻土 混合并且充分混勻。準備好 2 個 22mL 萃取罐，萃取罐底部依次裝入濾膜、篩板，最后用底 座螺母固定好。

　　? 樣品裝填：將萃取罐放于支架上，入口端放置好專用漏斗，首先將 5g 弗羅里硅土倒入 罐體中，并用夯實桿夯實。然后再將混合好的螺旋藻/硅藻土粉末倒入到罐體中，并用夯實 桿夯實。將裝填好的罐體放入 HPSE 高效溶劑萃取儀中，調用相應的方法（見圖 1），進行 萃取，最后將萃取液收集到 60mL 的圓底試管中，并在 35℃下氮吹至近干，加入 5mL 乙酸 乙酯/環己烷（v/v 1:1）混合溶劑。

　　 加標樣品：在 2g 螺旋藻粉末中加入 5μL 的 10ppm 多環芳烴標樣，混勻，加標濃度相 當于 25ug/kg。其余步驟同上。

　　實驗中，HPSE 高效溶劑萃取儀同時可以做 2 個樣品，1 個是未加標樣品，1 個是加標 樣品。

圖 1 樣品的高效溶劑萃取方法

　　2.2 GPC 凈化

　　?GPC 凈化條件：

　　?柱子：Bio-beads S-X3，20*300mm；

　　流動相：乙酸乙酯和環己烷混合液（1:1，v/v）；

　　流速：5mL/min；

　　進樣量：5mL；

　　檢測器波長：254nm；

　　 收集時間：14~33min；

　　收集液用 MultiVap-8 在 35℃下氮吹至 0.5mL。然后用乙酸乙酯定容至 1mL 作為最后分 析的樣液。

　　2.3 GC-MS 測試分析

　　 GC 條件：

　　 色譜柱：HP-5MS 30m*0.25mm*0.25μm

　　 進樣口溫度：300℃

　　?載氣：氦氣，流速：1mL/min

　　不分流進樣，1min 后分流 60mL/min

　　進樣量：1μL

　　柱箱：50℃，保持 3min，以 10℃/min 升至 280℃，保持 12min

　　質譜條件：

　　 溶劑延遲：8min

　　離子源溫度：150℃

　　四極桿溫度：230℃

　　傳輸線溫度：290℃

　　掃描方式：SIM

　　在上述的氣質條件下，對樣液進行氣質分析。

　　3. 實驗結果

　　3.1 GPC 分析結果

　　?3.2 標樣 GC/MS 分析

　　 圖 4 為濃度 50ppb 混標的 SIM 掃描色譜圖，其中苯并(a)蒽、?和苯并(b)熒蒽的出峰時 間為 25.271min、25.362min 和 28.004min。

　　3.3 樣品分析

　　 3.2.2 樣品空白

　　?圖 5 為樣品經過萃取、凈化后的 GC-MS 色譜圖，從整體基線來看，凈化效果良好，基 本不影響目標峰的定性定量，詳見圖 6。圖 6 可看出樣品中含有一定量的苯并(a)蒽、?和苯 并(b)熒蒽。

　　?3.2.3 樣品加標回收率

　　?上述分析可知樣品中含有一定量的目標物，所以樣品加標回收率實驗中以樣品作為空白， 計算加標回收率。

　　圖 7 為樣品加標后經萃取、凈化后的 SIM 掃描色譜圖。將該圖得到的三個目標物峰面 積扣去樣品空白中三個目標物的峰面積后和加入的標樣（50ppb）對比，得出加標回收率如 下表 1 所示。

　　參考文獻： [1] 方捷，海洋生物體內有機氯農藥、多氯聯苯和多環芳烴的 GPC 凈化條件，海洋環境監 測站

　　撰寫人：蘇麗評 北京萊伯泰科儀器股份有限公司 應用工程師