1、培養產生洋蔥根尖的材料是洋蔥鱗莖。鱗莖底部接觸水,不能離開水,也不能被水淹。其目的是同時滿足其對水和空氣的需要。同時要經常換水,因為水中由于微生物的活動和根細胞的活動,代謝產物增多;此外,還由于根細胞的呼吸不斷產生CO2,使水中H2CO3增多,氧氣缺少;微生物,如細菌的大量繁殖也使水質受到污染,這些都不利于根尖生長,所以要經常換水。一般一天至少一次,還要提供適宜的溫度。
2、剪取洋蔥根尖材料時,應該在洋蔥一天之中分裂最活躍的時間,一般在上午11點左右。如果因氣溫影響或不在—上述時間做實驗的話,可以在細胞有絲分裂最盛時取材,放人盛有固定液的培養皿中固定,即浸泡半天到一天。固定后用75%乙醇沖洗幾次,再放入盛有70%乙醇的小廣口瓶中保存。注意要等根尖長到1~5cm時才能切取,而切取的洋蔥根尖長度是2~3mm。根據實驗得知,根長到1~5cm時,根的長勢最佳,此時細胞分裂最旺盛,容易找到不同時期的分裂圖像。此時可取生長健壯的根進行觀察,切取洋蔥根尖2~3mm,這個長度要從根的頂端(根冠)開始算起,這個長度已將分生區包括了進來。若取材過長,在低倍鏡下尋找分生區就會很困難。
3、根尖培養好以后,裝片制作是否成功,關鍵的步驟是解離。15%的鹽酸溶液能溶解細胞壁之間的中層物質(胞間質),使組織中的細胞相互分開。否則,在顯微鏡下觀察時,細胞將發生重疊現象,導致實驗失敗。解離不充分,細胞重疊;解離過度,細胞會腐爛,所以解離要適度。為達到這一目的,配制的鹽酸濃度要適宜,切取的根尖應立即放入15%的鹽酸中,在室溫下解離10~15min。解離時間要視室內溫度而定,溫度低,時間稍長,溫度高,時間短。也可手拿鑷子,輕輕按正在解離的根尖,感覺酥軟即可。
4、漂洗的目的是洗去根中多余的解離液。如果不把多余的解離液洗去,一方面會影響染色效果,因為解離液中含HCl,而用染色的染料呈堿性;另一方面還會腐蝕顯微鏡的鏡頭。
5、染色時,染色液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深,否則鏡下一片紫色,無法觀察。也不能過淺,否則染色質和染色體的形態和數目不易辨清。
6、制片時,一方面要用鑷子把洋蔥根尖弄碎,另一方面要壓片,這樣可以使細胞分散開來。壓片時,在蓋玻片上再加一片載玻片的目的,一是避免壓碎和移動蓋玻片。二是使壓力大小適中,從而使組織細胞均勻分散。同時用力必須恰當,過重時會將組織壓爛,過輕則細胞未分散開,二者都將影響觀察。
7、結果與討論
在顯微鏡的一個視野中看到的細胞,多數處于細胞有絲分裂的間期,因為在一個細胞周期中,間期所占的時間占整個細胞周期的90%~95%,時間與細胞數目成正比。另外,在一個視野中,往往不容易找全有絲分裂過程中各個時期的細胞,可以慢慢地移動裝片,從鄰近的分生區細胞中尋找。