ELISA試劑盒還有就是在試驗中，必定有運用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺出和發生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易致使非特異吸附。濺出會對附近孔發生污染。出現氣泡則反響液界面有區別。所以，有時分一份標本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。
咱們在運用ELISA試劑盒96孔板的試驗測定的時分，常發現有“邊緣效應"，也就是外周孔顯色較基地孔深。經研究證真實溫育中的熱力學梯度也許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在試驗室的常規ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃擺布）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學梯度。因而運用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地掃除“邊緣效應"，而且可進步測定的重復性。