有針對性的轉染體內細胞／組織

實驗概要

在體內磁轉?是一種快速，簡單和高效的方法，特別是在體內靶細胞/組織的轉染。這個原系統與磁性納米粒子和核酸載體相結合。靶向這種方式，最大限度地減少全身分布，降低基因載體的失活，并降低毒性。此外，磁場力，提高靶組織的磁性納米粒子吸收，從而提高轉染效率。這可以減少所需的處理時間，這是改善體內的核酸轉染的關鍵。

主要試劑

體內PolyMag是一種陽離子聚合物為基礎的配方磁性納米粒子。它可以用來與任何核酸(質粒的DNA，反義寡核苷酸，基因的shRNA和siRNA)

體內DogtorMag是陽離子脂質體為基礎制定的磁性納米粒子。Dogtor，一個特定的陽離子脂質體，CombiMag磁性納米粒子。這種試劑是適合任何核酸(質粒的DNA，反義寡核苷酸，mRNA，shRNA和siRNA)。

實驗材料

小腫瘤淋巴結

卵巢

腎上腺

皮下腫瘤

唾液腺

腦

胰腺

脾

大的腫瘤

肌肉

外科手術設備

實驗步驟

體內PolyMag：

DNA，在體內PolyMag和鹽溶液，應在室溫。我們建議使用1微升PolyMag每微克DNA。

1．試劑的準備。

   1) 體內PolyMag。每次使用前，旋渦PolyMag，加入所需體積的PolyMag(根據DNA的所需)至無菌微管。

注：小于1微克劑量的DNA用前用去離子水稀釋，根據需要取所需體積。用剩的稀釋后的PolyMag應棄掉。

   2)  DNA溶液。在無菌小瓶內稀釋DNA(減去在體內PolyMag的體積)。

注：最終的DNA的濃度不得超過0.5 mg/mL。

2．復合物的形成。向PolyMag內加入DNA溶液立即上下搖動試管將其混合。將混合物在室溫孵育20分鐘。

3．注射。

   1) 將磁鐵置于目標組織上

   2) 慢慢的將混合物注入

   3) 讓磁鐵豎立從5分鐘到1小時

注：置于磁鐵幾秒鐘后，注射復合物于側腦室或腫瘤內。添加染料如Fast Green FCF可以為更好地監測注射復合體。

4．在適當的時間點監測基因的表達。

重要事項：

   1) 每頭動物注射體內PolyMag不要超過1 mL。

   2) 如果復合物已形成沉淀，不要注入。

體內CombiMag：

DNA，Dogtor試劑和鹽溶液，應該是在室溫下。我們建議使用每微克DNA加入1μLDogtor和1微升CombiMag。

1．試劑的準備。

   1) DNA溶液。用一半的注射量稀釋DNA在無菌小瓶(減去體內CombiMag的量)

注DNA的最終濃度不得超過0.5 mg/mL。用緩沖液稀釋DNA(HBS，PBS，生理鹽水，林格氏液)或5％葡萄糖溶液。

   2) Dogtor溶液。使用前，輕輕混勻試劑，用一半的注射量稀釋稀釋Dogtor，室溫下孵育5分鐘。

   3) 在體內CombiMag試劑。每次使用前渦旋試劑，使用1μL CombiMag /μg DNA。將CombiMag試劑直接加入進入管(不用任何溶劑稀釋)。

注：DNA體積小于1 μg，用前用去離子水稀釋，根據需要取所需體積。用剩的稀釋后的CombiMag應棄掉。

2．復合物的形成。DNA與Dogtor溶液的混合，輕輕混勻，在室溫下孵育5分鐘。再將混合物與CombiMag混合。輕輕混勻，室溫孵育20分鐘。

3．注射。

   1) 將磁鐵置于目標組織上

   2) 慢慢的將混合物注入

   3) 讓磁鐵豎立從5分鐘到1小時

注：置于磁鐵幾秒鐘后，注射復合物于側腦室或腫瘤內。添加染料如Fast Green FCF可以為更好地監測注射復合體。

4．在適當的時間點監測基因的表達。

重要事項：

   1) 每頭動物注射體內CombiMag不要超過1 mL。

   2) 如果復合物已形成沉淀，不要注入。