實驗材料 樹皮
試劑、試劑盒 沉淀緩沖液漂洗緩沖液溶解緩沖液
儀器、耗材 離心管
實驗步驟
3.1 提取總蛋白質 （見注釋 5)
( 1 ) 將去塞的 10 ml 空離心管稱重。我們選用韌性好的聚碳酸酯旋蓋圓底高速離心管。
( 2 ) 細胞碎裂：500 mg 新鮮組織（保存在 -80°C ) 在液氮中用研缽和杵搗成粉末狀。
( 3 ) 用 8 ml 預冷沉淀緩沖液將粉末再次溶解。
( 4 ) 將混合物轉移到稱重過的離心管中。
( 5 ) 用 2 ml 預冷沉淀緩沖液漂洗研缽。
( 6 ) 將漂洗液也轉移到離心管中。
( 7 ) 輕輕上下翻轉離心管 15s 混合，然后讓蛋白質在 -20°C 沉淀 1h。
( 8 ) 在 16000 g 離心 15 min ( 見注釋 6)。
( 9 ) 輕輕倒出離心管里的上清液。
(10) 用 10 ml 預冷漂洗緩沖液漂洗離心管中的沉淀（除掉殘留的 TCA ) ，并讓離心管在 -20°C 反應 1h。
(11) 在 16000 g 離心 10 min ( 見注釋 6) 。
(12) 真空干燥沉淀 2 h。
(13) 用玻璃棒將沉淀打碎成粉末狀。
(14) 連同干燥的沉淀一起稱重離心管。
3.2 溶解蛋白質
( 1 ) 用溶解緩沖液將粉末重懸。每毫克粉末用 10~30 μl 緩沖液溶解。這種緩沖液含有混合的離液劑（尿素、硫 脲）、去垢劑 （Triton-X 100，CHAPS ) 、還原劑 ( DTT) 、載體兩性電解質（IPG 緩沖液)。
( 2 ) 在室溫，400 g 離心 4 min，去除不溶性物質（如細胞碎片）。
( 3 ) 將上清液倒入一支干凈的離心管。
( 4 ) 在室溫，400 g 離心 4 min，將上清液倒入一支干凈的離心管。
( 5 ) 在 -80°C 保存上清液。
( 6 ) 根據 Ramagli 等 [8] 描述的方法，濃縮蛋白質可以用超過 6 次的重復定量實驗。計算出平均濃度，每根 IPG 膠條上樣 300 μg 蛋白質。