未知病原微生物采集幾級防護更安全？

　　與理化實驗室的安全事故表現形式不同，微生物實驗室的安全事故發生時不會伴有強烈的、毀滅性的現象，但是其后果完全不遜于理化試驗室。

　　但這樣的新聞也時有發生。

　　對日益復雜的微生物實驗室環境和研究對象，掌握了解微生物實驗室安知識是非常必要的。

　　首先，了解幾個概念

　　生物因子危害程度分級

　　根據生物因子（一切微生物和生物活性物質）對個體和群體的危害程度將其分為4級：

　　防護屏障和生物安全水平分級

　　防護屏障分為一級防護屏障（實驗室的生物安全柜和個人防護裝備等構成的防護屏障。）和二級防護屏障（實驗室的設施結構和通風系統等構成的防護屏障）；

　　生物安全水平分級：根據所操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施，將生物安全防護水平（biosafety level，BSL）分為4級，I級防護水平最低，IV級防護水平最高。

　　以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示實驗室的相應生物安全防護水平。

　　病原微生物危害程度分級

　　同樣的，據病原微生物（指夠使人或者動物致病的微生物）的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：

　　第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發現或者已經宣布消滅的微生物。

　　第二類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。

　　第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。

　　第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

　　第一類、第二類病原微生物統稱為高致病性病原微生物。

　　因此，對于采集病原微生物樣本應當具備下列條件：

　　（一）具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護水平相適應的設備；

　　（二）具有掌握相關專業知識和操作技能的工作人員；

　　（三）具有有效的防止病原微生物擴散和感染的措施；

　　（四）具有保證病原微生物樣本質量的技術方法和手段。

　　通常，常見的人間傳染微生物包括病毒、朊病毒、細菌、放線菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體、真菌等。

　　在病毒的160種及朊病毒的6種目錄中，像天花、埃博拉為第一類，口蹄疫、艾滋病毒、SARS病毒、瘋牛病為第二類，冠狀病毒、牛痘病毒、肝炎病毒、流行性感冒病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、瘙癢病因子為第三類，以及小鼠大鼠白血病病毒為第四類。

　　在細菌等的155種目錄中，前文敘述的布魯氏菌屬、霍亂弧菌為第二類，破傷風梭菌、腸桿菌屬、幽門螺桿菌及桿菌等大多數為第三類。

　　在真菌的59中目錄中，像粗球孢子菌等少數為第二類，曲霉、青霉、孢霉、色霉、刀菌等大多數為第三類。

　　因此藥品微生物實驗室標準菌株都為第三類病原微生物，而環境、水系統、樣品中分離出的菌就不一定，就如同前文小編敘述的分離出二類布魯氏菌。

　　因此，對于多數藥品微生物實驗室來說，所需生物安全實驗室級別為BSL-2級。

　　下面是一份關于如何建設良好的微生物實驗室安全管理程序

　　安全管理程序

　　一、 建設要求

　　1、BSL-1實驗室

　　1) 無需特殊選址，普通建筑物即可，但應有防止節肢動物和嚙齒動物進入的設計。

　　2) 每個實驗室應設洗手池，宜設置在靠近出口處。

　　3) 在實驗室門口處應設掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開放置。

　　4) 實驗室的墻壁、天花板和地面應平整、易清潔、不滲水、耐化學品和消毒劑的腐蝕。地面應防滑，不得鋪設地毯。

　　5) 實驗臺面應防水，耐腐蝕、耐熱。

　　6) 實驗室中的廚柜和實驗臺應牢固。廚柜、實驗臺彼此之間應保持一定距離，以便于清潔。

　　7) 實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗。

　　8)實驗室內應保證工作照明，避免不必要的反光和強光。

　　9)應有適當的消毒設備。

　　2、BSL-2實驗室

　　1) 滿足BSL-1的要求。

　　2) 實驗室門應帶鎖并可自動關閉。實驗室的門應有可視窗。

　　3) 應有足夠的存儲空間擺放物品以方便使用。在實驗室工作區域外還應當有供長期使用的存儲空間。

　　4) 在實驗室內應使用專門的工作服；應戴乳膠手套。

　　5) 在實驗室的工作區域外應有存放個人衣物的條件。

　　6) 在實驗室所在的建筑內應配備高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗證，以保證符合要求。

　　7）應在實驗室內配備生物安全柜。

　　8) 應設洗眼設施，必要時應有應急噴淋裝置。

　　9) 應通風，如使用窗戶自然通風，應有防蟲紗窗。

　　10) 有可靠的電力供應和應急照明。必要時，重要設備如培養箱、生物安全柜、冰箱等應設備用電源。

　　11) 實驗室出口應有在黑暗中可明確辨認的標識。

　　二、生物危害評估

　　當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應進行危害程度評估。危害程度評估應至少包括下列內容：生物因子的種類（已知的、未知的、基因修飾的或未知傳染性的生物材料）、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環境中的穩定性、感染劑量、濃度、動物實驗數據、預防和治療。

　　三、管理要求

　　1、管理責任

　　實驗室管理層對所有員工和實驗室來訪者的安全負責。最終責任由實驗室負責人或指定的與其地位相當者承擔。應任命一名有適當資質和經驗的實驗室安全負責人協助管理層負責安全事宜。安全負責人應制定、維護和監督有效的實驗室安全計劃。一個有效的實驗室安全計劃應包括教育、定位及培訓||、審核及評估、促進實驗室安全行為的程序。實驗室安全負責人應有權阻止不安全的活動。如設有安全委員會,實驗室安全負責人如果不是該委員會的主任,至少應是該委員會有職權的成員。實驗室負責人應制定規定和程序確保實驗室設施、設備、個人防護設備、材料等符合國家有關安全要求,定期檢查、維護、更新,確保不降低其設計性能。

　　2、員工健康管理

　　所有人員應有文件證明其對工作及實驗室全部設施中潛在的風險受過培訓。應要求所有人員根據可能接觸的生物接受免疫以預防感染。應保存免疫記錄。

　　3、安全設計

　　在考慮建筑新的實驗室或計劃對已建好的實驗室進行結構改造時,應遵守相應的國家、地方建筑法規和對實驗室的專用建筑安全標準.未得到實驗室負責人或其指定代表的許可禁止進行建筑或工程作業。

　　實驗室的設計應保證對技術區域中生物、化學、輻射和物理危害的防護水平控制在經過評估的相應風險程度,為關聯的辦公區和臨近的公共空間提供安全的工作環境,及防止風險進入周圍社區。通向出口的走廊和通道應無障礙。

　　應對空氣的流動速度進行常規監測以保證足夠的通風和防止潛在傳染因子和有害氣體的擴散。實驗室的每個出口和入口應可分辨,入口處應有標記,標記應包括國際通用的危險標志(如:生物危險標志、火險標志和放射性標志)以及其他有關的規定的標記。

　　應設緊急出口并有標記以和普通出口區別。緊急撤離路線應有在黑暗中也可明確辨認的標識。實驗室入口應有可鎖閉的門。門鎖應不妨礙緊急疏散。實驗室的進入應僅限于經授權的人員。

　　房間內的門按需要安裝門鎖正當操作高危險樣本時應有進入限制。存放高危險樣本、培養物、化學試劑或供應品,還需采取其他的保安措施,如可鎖閉的門、可鎖閉的冷凍箱、特殊人員的進人限制等。

　　應評估生物材料、樣本、藥品、化學品和機密資料被偷盜和被不正當使用的危險,并采取相應措施防范其發生。應有專門設計以確保存儲、轉運、收集、處理和處置危險物料的安全。

　　實驗室內溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等內環境符合工作要求和有關要求。

　　四、程序

　　應根據實驗對象、生物危害程度評估、研究內容、設施特點、設備具體制定相應的標準操作程序。實驗室的標準操作程序應包括對涉及的任何危險以及如何在風險最小的情況下開展工作之詳細的作業指導書。負責工作區活動的管理責任人每年應對這些程序至少評審和更新一次。

　　應制定書面計劃，至少包括以下內容:

　　1) 員工的健康監護。

　　2) 實施危害評估,記錄結果及采取措施的安排。

　　3) 化學品和其他危險物品的確認(包括造當的標識要求)、安全存放與處置及監控程序。

　　4) 操作有害材料的安全行為的程序。

　　5) 防止高風險和污染材料失竊的程序。

　　6) 確認培訓需求和教材的方法。

　　7) 獲得、維持和分發實驗室所有使用材料之安全數據單(MSDS)的程序。

　　8) 實驗室設備安全去污染和維護的程序。

　　9) 緊急程序,包括漏出處理程序。

　　10) 事件記錄、報告及調查。

　　11) 廢棄物處理和處置。

　　五、安全計劃的審核及檢查

　　1、安全計劃的審核

　　每年應(由受過適當培訓的人員)對安全計劃至少審核和檢查一次,包括但不限于下列要素：

　　1) 安全和健康規定

　　2) 書面的工作程序包括安全工作行為

　　3) 教育及培訓

　　4) 對工作人員的監督

　　5) 常規檢查

　　6) 危險材料和物質

　　7) 健康監護

　　8) 急救服務及設備

　　9) 事故及病情調查

　　10) 健康和安全委員會評審

　　11) 記錄及統計:

　　12) 確保落實審核中提出需要采取的全部措施的計劃。

　　13) 為每個領域特制的檢查表可有效地協助審核工作。

　　2、安全檢查

　　實驗室管理層有責任確保安全檢查的執行。每年應對工作場所至少檢查一次,以保證:

　　1) 應急裝備、警報體系和撤離程序功能及狀態正常

　　2) 用于危險物質漏出控制的程序和物品狀態,包括緊急淋浴

　　3) 對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質的存放進行適當的防護和控制

　　4) 去污染和廢棄物處理程序的狀態

　　5) 實驗室設施、設備、人員的狀態。

　　3、安全手冊

　　要求所有員工閱讀的安全手冊應在工作區隨時可用。手冊應針對實驗室的需要，主要包括但不限于以下幾方面：

　　1) 生物危險

　　2) 消防

　　3) 電氣安全

　　4) 化學品安全

　　5) 輻射

　　6) 危險廢棄物處理和處置。

　　安全手冊應對從工作區撤離和事件處理規程有詳細說明。

　　實驗室管理層應至少每年對安全手冊評審和更新。

　　實驗室中其他有用的信息來源還包括〈但不限于〉實驗室涉及的所有材料的安全數據單,教科書和權威性雜志文章等參考資料。

　　4、記錄

　　（1）職業性疾病、傷害和不利事件記錄

　　應有機制記錄并報告職業性疾病、傷害、不利事件或事故以及所采取的相應行動,同時應尊重個人機密。應保持人員培訓記錄。應包括對每一員工的安全指導和安全預備狀態的年度更新資料。

　　（2）危害評估記錄應有正式的危害評估體系。

　　可利用安全檢查表對危害評估過程記錄及文件化。安全審核記錄和事件趨勢分析記錄有助于制定和采取補救措施。

　　（3）危險廢棄物記錄

　　危險廢棄物處理和處置記錄應是安全計劃的一個組成部分。危險廢棄物處理和處置、危害評估、安全調查記錄和所采取的相應行動記錄應按有關規定的期限保存并可查閱。

　　（4）危險標識

　　應系統而清晰地標識出危險區,且適用于相關的危險。在某些情況下,宜同時使用標記和物質屏障標識出危險區。應清楚地標識在實驗室或實驗室設備上使用的具體危險材料。

　　通向工作區的所有進出口都應標明存在其中的危險。尤其應注意火險以及易燃、有毒、放射性、有害和生物危險材料。

　　實驗室管理層應負責定期評審和更新危險標識系統以確保其適用現有的危險。該活動每年應至少進行一次。應使涉及的非實驗室員工(如維護人員、合同方、分包方)知道其可能遇到的任何危險。員工應受培訓,熟悉并有關于緊急程序的專用書面指導。應標識和評審對孕婦健康和易感人員的潛在危險。應進行危害評估并記錄。

　　（5）事件、傷害、事故和職業性疾病的報告

　　實驗室應有程序報告實驗室事件、傷害、事故、職業性疾病以及潛在危險。所有事件(包括傷害)報告應形成文件,應包括事件的詳細描述、原因評估、預防類似事件發生的建議以及為實施建議所采取的措施。事件報告(包括補救措施)應經高層管理者、安全委員會或實驗室安全負責人評審。

　　5、培訓

　　實驗室負責人應保證對實驗室所有相關人員包括運輸和清潔員工等工作人員安全培訓計劃的實施。培訓應強調安全工作行為。

　　一項全面的培訓計劃始于書面的規劃,應包括對新員工的指導以及對有經驗員工的周期性再培訓。應要求員工在某一領域工作前閱讀適用的安全手冊。

　　員工應書面確認其已接受造當的培訓,閱讀并理解了安全手冊,包括其執行日期。一項安全培訓計劃至少要有消防和預備狀態、化學和放射安全、生物危險和傳染預防。課程應按照員工的崗位制定,應適當考慮懷孕、免疫缺陷和身體殘障情況。

　　應有一套系統評估每個員工對提供給其信息的理解力。實驗室應保證全體人員受過急救培訓||。

　　應提供物品和程序以減少涉及潛在傳染性材料、化學品或有害物質的不利作用和事件的發生。

　　應有救治指南,必要時,還應有與實驗室內可能遇到的危險相適應的緊急醫學處理措施。所有員工應熟悉被刺傷后所執行的程序。

　　6、個人責任

　　（1）食品、飲料及類似物品

　　食品、飲料及類似物品只應在指定的區域中準備和食用。食品和飲料只應存放于非實驗室區域內指定的專用處。冰箱應適當標記以明確其規定用途。實驗室內禁止吸煙。

　　（2）化妝晶、發、珠寶

　　禁止在工作區內使用化妝品和處理隱形眼鏡。長發應束在腦后。在工作區內不應配帶戒指、耳環、腕表、手錫、項鏈和其他珠寶。

　　（3）免疫狀態

　　所有實驗室工作人員應接受免疫以預防其可能被所接觸的生物因子感染。應按有關規定保存免疫記錄。對一特定實驗室的免疫計劃應根據文件化的實驗室傳染危害評估和地方公共衛生部門的建議制定。

　　（4）個人物品、服裝和化妝品不應放在有規定禁放的和可能發生污染的區域。

　　（5）良好內務行為

　　應指定專人監督保持良好內務的行為。工作區應時刻保持整潔有序。禁止在工作場所存放可能導致阻礙和絆倒危險的大量一次性材料。

　　所有用于處理污染性材料的設備和工作表面在每班工作結束、有任何漏出或發生了其他污染時應使用適當的試劑清潔和消毒。

　　對漏出的樣本、化學品、放射性核素或培養物應在風險評估后清除并對涉及區域去污染。清除時應使用經核準的安全預防措施、安全方法和個人防護裝備。

　　內務行為改變時應報告實驗室負責人以確保避免發生無意識的風險或危險。

　　實驗室行為、工作習慣或材料改變可能對內務和(或)維護人員有潛在危險時,應報告實驗室負責人,并書面告知內務和維護人員的管理者。

　　應制定在發生事故或漏出導致生物、化學或放射性污染時,設備保養或修理之前對每件設備去污染、凈化和消毒的專用規程。

　　7、安全工作行為

　　實驗室工作人員在實際或可能接觸了血液、體液或其他污染材料后,即使戴有手套也應立即洗手。

　　摘除手套后、使用衛生間前后、離開實驗室前、進食或吸煙前、接觸每一患者前后應例行洗手。

　　實驗室應為過敏或對某些消毒防腐劑中的特殊化合物有其他反應的工作人員提供洗手用的替代品。

　　洗手池不得用于其他目的。在限制使用洗手池的地點,使用基于乙醇的無水手部清潔產品是可4接受的替代方式。

　　8、接觸生物源性材料的安全工作行為

　　（1）處理、檢驗和處置生物源性材料的規定和程序應利用良好微生物行為標準。

　　（2）工作行為應可降低污染的風險。執行污染區內的工作行為應可預防個人暴露。

　　（3）如果樣本在收到時有損壞或泄漏,應由穿著個人防護裝備之受過培訓的人員開啟樣本以防止漏出或產生氣溶膠。應在生物安全柜內開啟此類容器。如果污染過量或認為樣本有不可接受的損壞,則應將樣本安全地廢棄而勿開啟。

　　（4）禁止口吸移液。

　　（5）應培訓實驗室工作人員安全操作尖利器具及裝置。

　　（6）禁止用手對任何利器剪、彎、折斷、重新戴套或從注射器上移去針頭。安全工作行為應盡可能減少使用利器和盡量使用替代品。

　　（7）包括針頭、玻璃、一次性手術刀在內的利器應在使用后立即放在耐扎容器中。尖利物容器應在內容物達到三分之二前置換。

　　（8）所有樣本、培養物和廢棄物應被假定含有傳染性生物因子,應以安全方式處理和處置。

　　（9）所有有潛在傳染性或毒性的質量控制和參考物質在存放、處理和使用時應按未知風險的樣本對待。

　　（10）操作樣本、血清或培養物的全過程應穿戴適當的且符合風險級別的個人防護裝備。

　　（11）操作實驗動物應穿戴耐抓咬、防水個人防護服和手套應戴適當的面部、眼部防護裝置,必要時,增加呼吸防護應在生物安全柜內操作。

　　（12）摘除手套后一定要徹底洗手。

　　（13）應最好采用電子灼燒滅菌裝置對微生物接種環滅菌。

　　9、氣溶膠

　　（1）實驗室工作行為的設計和執行應能減少人員接觸化學或生物源性有害氣榕膠。

　　（2）樣本只應在有蓋安全罩內離心。

　　（3）所有進行禍流攪拌的樣本應置于有蓋容器內。

　　（4）在能產生氣溶膠的大型分析設備上應使用局部通風防護,在操作小型儀器時使用定制的排氣罩。

　　（5）在可能出現有害氣體和生物源性氣溶膠的地方應采取局部排風措施。

　　（6）飼養、操作動物應在適當的動物源性氣溶膠防護設備中進行,工作人員應同時使用適當的個人防護設備。

　　（7）有害氣溶膠不得直接排放。

　　10、生物安全柜、安全罩

　　（1）在實驗室員工接觸危害等級I和H的場所,生物安全柜內的空氣在排放前只要通過高效過濾器可以再循環在實驗室員工接觸可能有危害等級田或以上的生物因子的場所,禁止將空氣再循環。動物實驗室禁止將空氣再循環。

　　（2）對于新安裝的生物安全柜和安全罩及其高效過濾器的安裝與更換,應由有資格的人員進行,安裝或更換后應按照經確認的方法進行現場生物和物理的檢測,并每年進行驗證。

　　（3）實驗室應時常監測生物安全柜以確保其設計性能能夠符合相關要求。應保存檢查記錄和任何功能性測試結果。

　　（4）在安全柜上應有作為檢查證明的標記。

　　（5）所用生物安全柜的放置、設計和類型應符合安全工作所要求的風險防護級別。

　　（6）所有生物安全柜之使用方式應避免降低其功能。

　　（7）生物安全柜、化學安全罩的通風應符合微生物和(或)化學的風險級別及符合安全要求。

　　小結

　　任何一起事故的發生都有原因，可能是大原因，可能是小原因，對于微生物實驗室、任何一個實驗室來說，做好預防、風險評估、規劃，才能將風險降到最低，將事故扼殺在搖籃之中。希望本文對各位有所幫助！