首先，將需測試的樣本溶解于水中，加入少量的班氏試劑，搖勻后將此混合物在沸水中加熱。反應時間約為3分鐘。如果測試樣本是還原糖，混合物中會形成紅黃色的沉淀物。這是因為還原糖會將硫酸銅中的二價銅離子(Cu2+)還原成一價亞銅離子(Cu+)，并以氧化亞銅(Cu2O)的形式沉淀出來。如果溶液中還原糖含量較低，產生的氧化亞銅便會相應減少，因此試驗后可能只會出現綠色、混濁的黃色或橙色沉淀物。
鑒定還原性糖過程
1 取一支試管，注入2mL待測樣品
2 向試管內注入2mL本尼迪克試劑
3 將這支試管放進盛有開水的大燒杯中，用酒精燈加熱煮沸2分鐘左右。
4 觀察溶液顏色
結果
非還原性糖如蔗糖，淀粉，纖維素等呈陰性
還原性糖如葡萄糖，果糖，半乳糖等呈陽性