雜交信號的放大實驗——地高辛標記探針的信號

雜交信號

地高辛SSCBSA熒光素

加濕盒水浴鍋培養箱

1.  用地高辛標記的探針與切片雜交并洗片（見“熒光原位雜交實驗”基本方案步驟1~6）。

2.  加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗體Fab片段于玻片上，蓋以22 mm² 大小的Parafilm 膜，置37℃溫育30 min。

3.  移去Parafilm 膜，分別在4×SSC、0.1% Triton X-100/4×SSC、4×SSC中洗片，每次15 min。

4.  吸去殘余4×SSC，加50 μl 地高辛信號放大溶液于玻片上，蓋以22 mm² 的Parafilm 膜，放加濕盒中。加濕盒外裹以鋁箔，置37℃溫育30 min。

5.  重復步驟3冼片。

6.  復染，加蓋玻片并鏡下觀察結果（見“熒光原位雜交實驗”基本方案步驟9~12）。