杜仲的蛋白純化及其藥理研究

杜仲是國內特有的藥用物種，經常作為臨床使用，一般都是使用皮入藥。對杜仲皮和杜仲膠顆粒中的蛋白進行了分離和蛋白純化，為杜仲中的生物活性成分和藥理研究提供了手段。但是杜仲中的很多化合物的結構和性質特別相近，因此其有效成分的提取和分離存在一定困難。

蛋白表達純化是一項廣泛應用于生物技術、生命科學和醫藥等研究領域的技術，用于重組蛋白表達的宿主細胞通常來源于原核細胞、哺乳細胞、昆蟲細胞和酵母細胞等蛋白表達系統。美迪西提供蛋白表達服務，擁有多種蛋白表達系統，包括原核蛋白表達系統、酵母蛋白表達系統、昆蟲細胞蛋白表達系統（桿狀病毒）哺乳動物細胞蛋白表達系統，具備多種融合技術，可以為客戶在蛋白表達與純化方面提供多種選擇。從方案設計、基因優化、表達條件優化到純化的技術體系，以提高客戶的目的蛋白表達水平。

1、杜仲的蛋白分離研究

用凝膠層析、反相高效色譜層析等分離純化方法，從杜仲樹皮中分離到分子量為4.16的一個新杜仲抗真菌蛋白，并進行了蛋白純化。

（1）用SDS-PAGE方法從杜仲膠顆粒中分離到分子量約為14、16、18、22、24、28、30、32和55 kDa的9個杜仲膠顆粒結合蛋白。用液相色譜質譜聯用(LC-MS/MS)技術，鑒定了4.16、4.2、8.3、16和18 kDa蛋白序列，獲得14個肽片段。在抗菌肽數據庫(APD)中對這14個肽片段進行結構分析、抗菌活性預測和序列比對，結果顯示有11個肽片段具有抗菌肽典型結構。

（2）紙片法對EAFP3進行體外抗菌活性檢測，抑菌活性檢測結果表明:EAFP3可抑制酵母、酵母類真菌、霉菌和植物病原真菌的生長，EAFP3對白色念珠球菌、黃曲霉、番茄灰霉病菌的IC_(50)值分別為31.25、31.25和62.5μg/mL。EAFP3對高溫有一定耐受性，在100℃加熱30 min仍有顯著抑制活性；可適應較寬pH范圍，在pH從5.8-8.0范圍內都有顯著抑制活性。該研究結果可能為創制新型生物農藥和生物藥物提供了先導化合物信息，為克隆編碼杜仲抗菌蛋白的基因提供了引物和探針設計序列。

2、杜仲的藥理研究

（1）抗腫瘤作用

現代藥理實驗證明杜仲有抗癌和抑癌之功效，其有效成分與其杜仲所含的木脂素、苯丙素及環烯醚萜類化合物有關。如研究者從杜仲葉氯仿提取物中分離出的地普黃酮，是一種干擾T淋巴細胞功能的免疫抑制物質，對人鼻咽癌(KB)和鼠淋巴細胞白血病(P388)均有生長抑制活性。杜仲具有興奮垂體-腎上腺皮質系統、增強腎上腺皮質功能的作用。

（2）降壓作用

杜仲的降壓作用是經過多年臨床證實的，現代藥理研究試驗有效地揭示了這一作用的機制。實驗證明，杜仲水提物對犬有明顯的降壓作用，而且療效平穩、無毒、無副作用。

（3）對免疫系統的影響

給小白鼠腹腔注射杜仲葉的20%和50%的乙醇提取物，可明顯增強小白鼠脾淋巴細胞轉化功能及腹腔巨噬細胞的吞噬功能，而對正常小鼠脾抗體形成細胞無明顯影響。熱水泡杜仲茶提取物用1%NaOH凍結，干燥后得到的堿性物質為含糖醛酸的酸性多糖類，該堿性物有抗破壞人體免疫系統病毒的功能，有可能用于預防和治療艾滋病。

（4）抗衰老作用

杜仲能增強機體的非特異性免疫功能，對細胞免疫具有雙向調節作用，提示杜仲具有抗衰老作用。現代研究發現，杜仲水提物能抑制乙二胺四乙酸、H2O2、維生素C等對脫氧核糖、DNA造成的氧化損傷。

（5）骨細胞增殖作用

杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR106成骨樣細胞體外共同培養，結果顯示，水提液具有最強的促進細胞增殖作用，其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對細胞增殖有一定的促進作用，而萃取后的剩余水層仍保留與原水層相似的促進細胞增殖作用，表明杜仲中極性大的部分可能含有直接作用于成骨細胞的活性成分。

（6）其他作用

杜仲水煎劑對結核桿菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、炭疽桿菌有抑制作用。杜仲葉的各種麻醉犬均有利尿作用，且無快速耐受現象，對正常大鼠和小鼠也有利尿作用。杜仲的利尿作用與桃葉珊瑚甙有關，該成分能刺激副交感神經中樞，加快尿酸轉移和排出，利尿作用明顯。此外杜仲還有利膽作用、降血脂作用、保胎作用、增強肌肉作用、中樞抑制作用等。

總之，杜仲具有廣泛的藥理作用，其應用前景廣闊，在醫藥領域具有巨大的潛力。