條件培養基的制備

條件細胞

克隆用培養基 除菌濾器

1. 條件細胞（條件細胞：同一種細胞、其他細胞系（如，3T 3 細胞），或小鼠胚胎成纖維細胞）生長至 50 % 匯合。

2. 更換培養基，繼續培養 48 h 。

3. 收集培養基。

4. 離心，1000 g，10 min。

5. 0.45 μm 無菌過濾器（除菌濾器：0.45 μm 或0.22 μm ，過濾瓶）過濾（培養基可以先經過 5 μm 和 1.2 μm 過濾器預先過濾)。

6. 將條件培養基（克隆用培養基：Ham’s F12，加 10 % FBS 或適合待克隆細胞的培養基） -20°C 保存。

7. 用前解凍，按照如下比例加在克隆培養用培養基中：1 份條件培養基加 2 份克隆培養用培養基。

離心、凍存、解凍、過濾，這些步驟都有助于避免從原培養瓶中攜帶細胞。如果克隆培養的細胞與條件細胞是同一種細胞，這個問題就輕一點。但是用不同細胞系或原代小鼠成纖維細胞作為條件細胞可能更有利于克隆培養。如果用這種方法建立細胞株，細胞的性質必須經過鑒定（見方案 16. 10、方案 16. 11、方案 16. 12)，排除因條件培養基而引起的細胞交叉污染。