實驗方法原理
實驗材料 0～6 h 果蝸胚胎
試劑、試劑盒 脫色洗液胚胎洗液鹽洗液緩沖液 RMgCl2 液氮
儀器、耗材 細尼龍網玻璃燒杯錐形管玻璃棒塑料注射器真空吸氣機Wheaton 杜恩斯勻漿器 Sorvall Superspeed 離心機Beckman 超速離心機
實驗步驟
1. 試劑準備：
脫色洗液：50％（V/V）家用漂白劑的蒸餾水溶液
胚胎洗液：0.7％（m/V）NaCl/0.4％（V/V） Triton X－100， 室溫和 4℃
鹽洗液：0.7％ （m/V） NaCl， 4℃
緩沖液 R，4℃
1 mol/L MgCl2
液氮
2. 細尼龍網在支撐物上放好，將約 100 g 0～6 h 果蠅胚胎放在網上。用冰冷的水沖洗以去除酵母和其他污染物。
3. 將胚胎浸泡在 3L 室溫的脫色洗液中 90 S。用 1L 室溫的胚胎洗液快速清洗胚胎。再用蒸餾水徹底沖洗。將胚胎轉移到冰上的 800 ml 玻璃燒杯中。
4. 除非另外指出，均在冰上或冷室操作。加入 500 ml 4℃ 的胚胎洗液，用玻璃棒攪動 重懸胚胎。使胚胎沉到燒杯底部，靜置 2 min。用真空吸氣機吸出胚胎洗液，注意不要碰到燒杯底部的胚胎。
5. 再加入 500 ml 4℃ 的胚胎洗液重復步驟 3。
6. 重復步驟 3 兩次，每次使用 500 ml 4℃ 的鹽洗液，并且每次靜置 5 min， 使胚胎沉到 燒杯底部。
7. 重復步驟 3 兩次，每次使用 500 ml 4℃ 的緩沖液 R，并且每次靜置 10 min， 使胚胎 沉到燒杯底部。清洗完第二次后，吸出緩沖液到只剩 80 ml。
8. 將燒杯中的物質轉移到冰上的 40 ml Wheaton 杜恩斯勻漿器中。使用 B 型研磨棒勻漿 15 次，再使用 B 型研磨棒勻漿 40 次。如果還有剩余的物質存在，重復勻漿。確定已經完全勻漿。
9. 將勻漿液轉移到冰上的 17 mm×100 mm 聚丙烯管中。4℃，7500 g （Sorvall SS－34 轉子 8000r/min） 離心 5 min。從管的中間吸取上清轉移到 50 ml 錐形管中。
10. 用 1 mol/L MgCl2 調節鎂離子濃度為 7 mmol/L。
11. 將上清轉移到 14×89 mm 薄壁超速離心管中。4℃，200 000 g （使用 Beckman SW41 轉子的超速離心機 40 000 r/min） 超速離心 2.25 h。
12. 用金屬刮刀除去每管的白色脂上層并丟棄。收集金棕色的液體層并集中到冰上的 50 ml 錐形管中。在液氮中速凍。
13. 在室溫水浴中解凍抽提物。4℃，192 000 g （使用 Beckman SW55 轉子的超速離心機 45 000 r/min） 離心 2.25 h。
14. 如果有白色脂上層則去掉。得到的 S-190 抽提物轉移到 50 ml 錐形管中。將抽提物分裝到微量離心管中，每管 1ml，并在液氮中速凍。-80℃ 可以保存 3 年。