1. 準備兩種 18ml,濃度分別為 20% 和 60% 的蔗糖分離緩沖液(聚胺,水相或己二醇法的緩沖液),然后以線性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯離心管中,用梯度生成器形成沿離心管的密度梯度。
2. 將染色質粗品溶液輕輕地加到梯度上,用帶吊桶式轉頭的 JS-13 ( Beckman Instruments ) 或 HB-4 ( Sorvall) 離心機在 2500 g 離心 15 分鐘。
3. 3 ml —份輕輕地從梯度頂部取出樣品,取少量用相差顯微鏡檢查染色質的存在情況。
4. 收集含染色體的組分在 3000 g 離心 10 分鐘。
5. 用大約為起始染色體粗品溶液體積 1/30 的分離緩沖液重懸浮染色體,繼續下一步研究。 展開 |