實驗方法原理 染色體顯帶是沿著整個染色體的長軸,能顯現出著色深淺不同、橫向走行的帶(Band)。
顯帶原理尚未完全弄清,從多種方法證實,染色體顯帶現象是染色體本身存在著帶的結構。因用相差顯微鏡觀察未染色的染色體時,也能直接觀察到染色體存在著帶的現象。但用特殊方法處理后,再用染料染色,則帶更加清楚。
隨顯帶方法不同,顯出來的帶的特點也不一樣,說明帶的出現又與染料特異結合有關。一般認為,易著色的陽性帶(Positive Band)為含有A-T多的染色體節段;相反,G-C多的則不易著色,為陰性帶(Negative Band)。
有報道已被定位的正常基因相異常基因絕大部分都在陰性帶區。人們推測,看家基因(House Keeping Gene)可能多在陽性區帶,組織特異基因在陰性區帶。人染色體能顯現出近2000 個G帶,這些帶再融合成一般顯微鏡下可見的850 條左右的帶。
實驗材料 標本
試劑、試劑盒 磷酸緩沖液QDQM
儀器、耗材 顯微鏡吸管蓋片鑷子
實驗步驟
1. 漂洗
取經過干熱預處理或已老化的染色體標本,置入pH6.0緩沖液中浸5~10 分鐘;
2. 染色
浸入pH6.0的GM和QD染液中5~10 分鐘;
3. 漂洗
浸入新鮮pH6.0緩沖液中漂洗2 次,每次5 分鐘;
4. 觀察
向標本染色體面滴1~2 滴新鮮緩沖液,覆以蓋片(避免出氣泡),置熒光顯微鏡下觀察。
注意事項
1. 觀察期間,要隨時滴加緩沖液,以防蒸發干涸后熒光減弱。
2. 染色后標本應充分漂洗,避免殘留熒光染液,否則背底將發熒光影響觀察,標本如因染色不足發光較弱,可揭去蓋片重染。