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  • 發布時間:2020-08-11 09:33 原文鏈接: 染色末端的清潔純化實驗

    試劑、試劑盒 乙醇洗脫上樣液

    儀器、耗材 磁性分離裝置平板夾平板架測序反應純化系統

    實驗步驟



    一、材料


    1. 緩沖液、溶液和試劑


    用于測序的膠洗脫/上樣液 (見表 9-4)


    90% 乙酵洗滌液


    2. 特殊設備


    MagnaBotⅡ磁性分離裝置(Promega)


    平板夾 96(Promega)


    平板架(Promega)


    3. 其他


    WizardMagneSil 測序反應純化系統(Promega; 包括 MagneSilGREEN[順磁性顆粒])


    96 孔板


    二、方法




    1. 將 96 孔板裝到平板夾 96 中 [圖 9-10(a)、(b)]。


    2. 使用平板架 [圖 9-10(c)] 將平板放置在自動機械工作臺上。


    3. 劇烈振蕩瓶以重懸 MagneSil 顆粒,每 20ul 測序反應體系中加入 180ulMagneSil顆粒。


    4. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。


    5. 將板放到 MagnaBotⅡ磁性分離裝置 [圖 9-10(d)] 上以捕獲顆粒。


    6. 移棄液體,避免損失任何顆粒。


    7. 從 MagnaBotⅡ設備上取出板,置于平板架上。


    8. 每個樣品中加入 100ul90% 的乙醇。


    9. 室溫下溫育 5 min, 期間分別在 0、2.5 min 和 5 min 時進行抽吸混合。


    10. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。


    11. 移棄液體,避免損失任何顆粒。


    12. 重復步驟 7~11 使總洗滌次數達到 2 次。


    13. 顆粒在室溫下風干約 10 min。


    14. 加適量洗脫/上樣液(表 9-4)。


    15. 室溫下溫育 1~2 min。


    16. 將板放到 MagnaBotnⅡ磁性分離裝置上以捕獲顆粒。


    17. 將已純化的測序反應體系轉移到干凈的 96 孔板,小心以避免損失任何顆粒。


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