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  • 發布時間:2020-06-09 19:47 原文鏈接: 染色質免疫共沉淀研究

    真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在,研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統的EMSA技術相比,染色質免疫沉淀技術(ChIP)能真實完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白,是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的最佳方法。

    染色質免疫沉淀技術(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)作為最佳的研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法,它的基本原理是在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物,并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段,然后通過免疫學方法沉淀此復合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。

    CHIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。而且,CHIP與其他方法的結合,擴大了其應用范圍:CHIP與基因芯片相結合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子靶基因的高通量篩選;CHIP與體內足跡法相結合,用于尋找反式因子的體內結合位點;RNA-CHIP用于研究RNA在基因表達調控中的作用。由此可見,隨著CHIP的進一步完善,它必將會在基因表達調控研究中發揮越來越重要的作用。

    作為表觀遺傳學的專業解決方案供應商,艾美捷向您推薦Epigentek品牌的最熱銷的常規的染色質免疫試劑盒和最有特色的植物ChIP試劑盒。另外,除了成套的試劑盒外,艾美捷同樣能為您提供與ChIP試劑盒相關的ChIP級抗體,可廣泛用于包括ChIP、IHC、IF等在內的多種實驗應用。

    性價比最高的組織染色質免疫共沉淀試劑盒(ChIP)(p-2002)提供了對細胞樣品進行染色質免疫沉淀反應所需的所有試劑。并且本試劑盒中含有一種陽性對照抗體(RNA聚合酶II抗體)、一種陰性對照抗體(正常小鼠的IgG)、GAPDH引物(可以作為陽性對照來保證試劑盒中試劑和操作步驟沒出現問題)。在大多數生長期的哺乳動物細胞中,RNA聚合酶II會在GAPDH基因啟動子上富集,準備起始轉錄,因此該啟動子能與RNA聚合酶II發生免疫沉淀反應,而不能與正常小鼠IgG發生。在本染色質免疫沉淀反應中,細胞耦合了甲醛,提取出其中的染色質。染色質進行適當的打斷,然后加入到微孔中與其表面上吸附的抗體發生免疫反應。特異性結合到微孔上的DNA從抗體-捕獲蛋白-DNA復合物上釋放出來,翻轉后,通過本公司專門設計的高速離心柱純化。洗脫下來的DNA可直接用于隨后的各種分析。本試劑盒是基于96孔板的,市場上同類產品中最快捷的試劑盒,對CHIP過程進行了徹底的簡化,操作簡捷,方便易學整個處理過程不到5小時,同時可拆卸式的96孔板模式使研究人員能根據自己需要選擇手工或是高通量分析。

    ChIP試劑盒—染色質免疫共沉淀研究完整方案ChIP試劑盒—染色質免疫共沉淀研究完整方案

    (左圖為ChIP試劑盒(p-2002)簡單便捷的實驗流程)(右圖為ChIP試劑盒(p-2002)卓越性能)


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