基本方案 1 誘導小鼠急性弓形蟲 T. gondii感染材 料T. gondii弓形蟲 M E 4 9 株 慢 性 感 染（1 個月以上）的 雌 性 小 鼠（C 57B L /6、 C B A /Ca 或 Swiss-Webster) (見輔助方案 2)。 7 0 % (v/V ) 乙醇 P B S , p H 2 無菌原體小鼠，雌 性（6?8 周齡，見 表 11. 2 . 1 中易感品系） 剪刀 小鉗狀骨針 研缽和研棒 帶 22 G 針 頭 的 I m l 或 3m l 注射器 載玻片和 22m m X 22m m 的蓋玻片 18 G 、 I.5in (3. 8c m ) 強飼針 1.C O 2 吸 入 法（附 錄 2 G ) 處 死 感 染 的 小 鼠 ，并 用 7 0 % 乙醇清洗頭部。切開皮膚暴露顱骨，用小彎剪刀打開顱骨，暴露大腦，取出大腦組織置于研缽中。 2 . 腦組織研磨后加入 Iml P B S ，用 帶 有 22 G 針 頭 的 I m l 或 3m l 注射器反復的吸、吹懸液進行勻漿。 3 . 取 20ul 樣品滴于載玻片上，制三份片子，蓋 上 22m m X 22m m 的蓋玻片， 100 倍顯微鏡下觀察，并計數整個片子中的包囊數。計算三個片子的平均包囊數，換算出每毫升腦懸液中的包囊數。用 P B S 把腦勻漿液中的包囊稀釋至所要求的濃度（50?500/ml) 4a. 腹腔內感染：用 帶 有 22 G 針頭的注射器給清潔級雌性小鼠腹腔注射 0.2m l 的腦組織勻 漿 液（通 常 含 10?2 0 個組織包囊）（附 錄 2E )。 所用的包嚢數越多， B A L B /c 與 C B A /C a 小鼠之間的易感性的差異就越明顯。膜內感染 20、 4 0 或 8 0 個包嚢后，分 別 有 1 2 % 、 5 0 % 、 7 5 % 的 B A L B /c 小鼠感染 3周內死亡，而在相應時間內沒有觀察到有感染的 C B A /C a 小 鼠 死 亡（Suzuki 衫 ci/.，
1993) 4b. 口腔感染：用 18 G 、 1.5in 強 飼 針 將 0.2m l 包囊懸液注射給清潔級雌性小鼠（一般10?100 個包囊）。 5 . 評 估 感 染 進 展 和（或）機 體 免 疫 應 答（見輔助方案 1)。 基本方案 2 小鼠慢性弓形蟲腦炎模型材 料無 病 原 體 易 感 品 系 小 鼠（雌 性 6?8 周 ；易 感 品 系 小 鼠 見 表 19. 3 . 1 ; 飼養見單元1. 2) P B S , p H 7. 2 帶 有 22 G 針 頭 的 30m l 注射器 1 . 用 10?2 0 個 包 囊 的 M E 4 9 經 口 腔 或 腹 膜 感 染 易 感 品 系 小 鼠（見 基 本 方 案 1 ，步驟4)。 2 . 在感染后 4 周 和 8?1 0 周（見 輔 助 方 案 1 的臨床評估）用 甲 氧 氟 烷 麻 醉 小 鼠（附錄2 D ) 。 打開胸腔，用 帶 2 2 G 針頭注射器經左心室灌注 20 ml P B S 入循環系統，去除大腦血液。 3 . 如基本方案 1 中所述取出大腦，然后評估弓形蟲腦炎進展情況（見 輔 助 方 案 1)。評估一個以上的參數，矢狀分離大腦半球。 基本方案 3 感染 r.gowdf/ 的重癥聯合免疫缺陷小鼠重癥聯合免疫缺陷小鼠（SCID) 缺 少 T 細 胞 和 B 細胞。當 用 M E 4 9 感染小鼠時，感 染 后 2?3 周死亡。為制作慢性感染，可給予磺胺嘧啶，而當磺胺嘧啶停藥后可造成感染的重新加重并死亡。此模型模仿弓形體腦炎在免疫寬容個體的發病機制。本實驗可通過 回 輸 T 細胞或其他細胞給 S C I D 鼠來研究這些細胞對 T . f 的免疫應答。 材料無病原體感染的 C B-17S S C I D 小 鼠（雌 性 6?8 周齡，Jackson 實驗室供給） 磺 胺 嘧 啶（Sigma) Naive 小鼠淋巴細胞懸液（單 元 2.1) ， 免 疫 動 物（即 ts-4 株感染的小鼠；見基本方案 4)，或 M E 4 9 慢 性 感 染（1 個月以上）的 B A L B /c 小鼠 1 . 雌 性 6?8 周 齡 C .B-17S S C I D 小鼠飼養于頂蓋過濾型飼養籠內，置于層流柜，自動喂飲高壓滅菌的食物和水。 2 . 經口腔或腹腔給予 10?2 0 個 T .gondii M E 4 9 包 囊 以 感 染 小 鼠（層流柜內操作，見基本方 案 1)。 3 . 慢性感染模型：感 染 后 3?IOd 開始用磺胺嘧啶處理動物（200m g /L 飲用水），持 續 3周 。 停 止 應 用 續 胺 嗔 咬 后 ，死 亡 率 取 決 于 感 染 后 起 始 給 藥 的 時 間 ，給 藥 越 早 存 活 時間 越 長（如 感 染 后 3d 給 藥 ，可 存 活 3 周）。 4 . 細胞）過繼試驗：停 止 給 磺 胺 嘧 啶（再活化慢性感染模型）( I d 前 ，靜脈或腹腔給予 IX IO7?5 X I O 7 的 naive 小 鼠 或 T. gondz’f 免 疫 小鼠的淋巴細胞懸液（附 錄 2 E 感染技術）。 5 . 評估 感 染 進 展 和（或）機 體 免 疫 應 答（見輔助方案 1)。 基本方案 4 溫度敏感的 TS-4 T. 菌株的感染模型材 料ts-4 菌 株 速 殖 子（見輔助方案 3) 無病原體雌性小鼠（6?8 周齡） H B S S P B S 帶 有 26 G 針 頭 的 I m l 注射器 1 . 如輔助方案 3 中描述的，冷 凍 保 存 在 人 類（陰莖）包皮成纖維細胞中 ts-4 菌株速殖子 ，復蘇時將水浴溫度調至 33°C 。按照輔助方案 3 的方法破碎細胞收集速殖子，并通過離心去除速殖子懸液中的人成纖維細胞。 2 . 小鼠經腹腔注射含 IXlO4 速殖子的 PBS (附 錄 2E )， 4?8 周 后 ，腹腔加強注射 2XIO5 速殖子。再 經 過 2?4 周 ，重復加強一次。 3 . 最 后 一 次 加 強 注 射（附 錄 2 H ) 1 周 后 ，無 菌 收 集 脾 臟 ，制 備 脾 臟 細 胞 懸 液 ，用H B S S 配 成 IXlO8?2X108個細胞/m l 的 懸 液（單 元 2.1)。 4 . 用 帶 有 26 G 針 頭 的 I m l 注射器，將 0.2m l 細 胞 懸 液（2 X 107?4 X 107 個）經尾脈注射 入 naive 小 鼠 中（附 錄 2E )。 輔 助 方 案 1 對 T.gondii 感染進展和免疫應答的評估材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)T .gonii 感 染 的 小 鼠（見基本方案 1、 2 或 3) 固定劑 抗 多 克 隆 抗 體（BioGenex Laboratories) la. T .gonii 急性感染模型：感染后第一周的不同時間， CO2 吸 入 法 處 死 小 鼠（附錄2 G ) ，取出肝臟、肺臟、心臟、大腸、小 腸 和 腸 系 膜 淋 巴 結（口腔感染情況下）做組織病理學檢查。 lb. 弓形蟲腦炎模型：采用 0 〇 2 吸入法處死小鼠。（對免疫潛能健全動物）感 染 4?10周后取大腦，而 對 S C I D 小鼠制備的慢性感染模型，在磺胺嘧啶停藥后要每周進行上 述 操 作（見基本方案 3)。 2 . 所取部分器官在固定液中室溫固定過夜。 3 . 每種器官制備 2?4 份 5/xm 厚 度 的 組 織 切 片（間 隔 50?IOOiLtm )。 4 . 蘇木精/伊紅染色標本，觀察炎性改變，并 用 抗 T.gondii 多 克 隆 抗 體 對T.gondii 病
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