柱層析原理及影響因素

　　免疫親和層析

　　原理：親和色譜分離蛋白以一個蛋白與特異性配基配對到色譜基質上，且蛋白質與配基間具有可逆的相互作用作為基礎。目標蛋白與配基之間的生物學相互作用，可以是由于靜電學的相互作用或是分子間疏水的相互作用，也可以是范德華力或氫鍵結合力產生的。

　　影響因素：主要是親和標簽的完整程度，緩沖液的組分。

　　離子交換層析

　　原理：離子交換對分子的分離是基于它們表面凈電荷的差異。以蛋白質為例，它由許多包含弱酸弱堿集團的不同氨基酸組成。它們表面的凈電荷會隨著周圍環境的pH值改變而改變。對某一特定蛋白質來說，其表面凈電荷與pH之間的相對關系是獨特的，而離子交換層析正是利用了這一特點來完成對不同蛋白質的分離。

　　影響因素：主要是緩沖液的pH值，鹽濃度。

　　疏水相互作用層析

　　原理：疏水層析根據蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白質與疏水層析介質疏表面可逆的相互作用來分離蛋白。純水狀態下，任何疏水作用都太弱而不能導致配基與蛋白之間的相互作用。某些鹽卻可以增強疏水相互作用。高濃度的鹽會增強相互作用，而低濃度的鹽會降低相互作用。但是目前尚無被廣泛接受的關于疏水相互作用層析機制的理論。

　　影響因素：環境溫度，鹽濃度。

　　凝膠過濾層析

　　凝膠過濾根據分子通過凝膠填料大小不同對其進行分離。以蛋白質為例，因為分子不與凝膠填料結合，故緩沖液成分不會直接影響分辨率。

　　影響因素：蛋白質分子量。