標準菌株的管理與控制！

　　一、目的

　　規范用于微生物實驗質量控制和操作評估的標準菌株管理與使用程序，盡量減少交叉污染確保實驗結果可靠與實驗室安全。

　　二、范圍

　　本工作指引適用于微生物實驗室所有標準菌株的管理與使用。

　　三、參考

　　四、內容

　　4.1 程序

　　1.標準菌株的復壯

　　a.將復壯所用的0.5-1ml液體培養基（如TS或BPW）置于室溫；

　　b.將標準菌株從冰箱取出置于室溫；

　　c.無菌操作去除菌株的包裝物；

　　d.無菌操作敬液體培養基導入菌株容器；或者無菌操作剪開菌株包裝物，將菌株倒入液體培養基；

　　e.將試管在37℃下放置一段時間后，使菌種完全溶解到培養基中；

　　f.輕輕搖動試管形成懸浮液；

　　g. 從菌種懸浮液中接種幾環到培養基平板（如營養瓊脂）劃線培養；

　　h. 將接種過的平板置于合適的溫度和條件下培養復壯。

　　2. 從培養過的平板或斜面上挑取幾個菌落，按照相應的LI接種到選擇性培養基上。

　　3. 將挑選出的菌落按照相應的LI進行菌種確認。進行革蘭氏染色或者鏡檢，并純化后按照相應的LI進行生化試驗確認。記錄下所有的現象。

　　4. 在每年復壯或者買入是都要進行菌種確認實驗。

　　5. 菌種確認達到要求后，使用Microbank Frozen Beads標準儲備菌株。

　　a.取一定量的標準菌株培養物（18-24h），無菌操作接種到裝有小珠的小瓶內并加入肉湯（BPW）。關緊小瓶并顛倒4-5次乳化培養物。不要劇烈搖晃，避免液體灑出；

　　b.將多余的液體吸出。關緊小瓶；

　　c.在小瓶上貼上標簽，標明菌種名稱和準備日期；

　　d.小瓶在冷凍條件下（大約-20℃）可儲存一年；

　　e.從Microbank中準備工作菌株：從小瓶中無菌操作取出一個小珠，接種到非選擇性培養基平板或斜面，或者放入液體培養基中。小珠從小瓶中取出后決不可以再放回。立即將小瓶放回冷凍；

　　f. 接種過的平板、斜面或者肉湯放在37℃培養24-48h。一旦發現平板、斜面或者肉湯有微生物生長后立即從培養箱取出；

　　g.在平板、斜面或者肉湯上粘貼標簽，注明菌種名稱、準備日期和有效期。放在冰箱大約4℃儲存。

　　6. 每次使用一支工作菌株，頻率按照工作需要，通常為一個星期。一旦發現菌株有污染現象后立即處理掉并使用新的工作菌株。工作菌株在冰箱內保存不超過兩個星期。

　　7. 重復5-6步驟可更新工作菌株。

　　8. 一旦標準菌株用完或者表現不滿意時，重復1-4步驟更新標準菌株。

　　4.2 儲存

　　1.采購回來的標準菌株需單獨鎖在-20℃的冰箱內。

　　2.未使用的Microbank小珠放在小瓶內儲存在4℃避免陽光直射。一旦發現Microbank有以下情況時不得使用：

　　發現小瓶有泄露現象；

　　儲存液發現渾濁可能表示已經被污染；

　　過了有效期。

　　3. 所有的采購、復壯、使用和銷毀必須記錄并由主管確認。

　　五、工作流程

　　1.采購回的標準菌株可放在-20℃儲存，直到過期。

　　2. 使用Microbank Frozen Beads system 制備儲存標準菌株。

　　3.在小瓶上注明標準菌株的名稱、準備日期和有效期。-20℃可保存一年。

　　4.在平板/斜面/肉湯上注明標準菌株的名稱、準備日期和有效期。依照需求使用，一旦發現菌株有污染現象后立即處理掉并使用新的工作菌株。