四、發光免疫分析：發光免疫分析：直接用發光物質標記抗原或抗體
生物的發光劑：熒火蟲熒光素（酶催化發光）
化學的發光劑：魯米那、吖啶脂等在有過氧化氫的弱堿溶液中即可迅速發光。
美國CHIRON公司生產的ACS-180使用類均相的包被抗體的磁性微粒，擴大了反應面，加速了免疫反應，又應用吖啶脂作標記的化學發光分析，此方法由于不用酶，避免了許多影響因素，又無催化劑，只要改變pH即可使標記物發光，故大大提高了檢測速度，平均每一反應僅需7.5分鐘，每小時可做180次分析。
五、時間分辨熒光免疫分析技術
用稀土元素和鑭系元素中的銪(Eu)、鋱(Tb)、釤(Sm)和鏑(Dy) 四種元素的螯合物作標記，因為只有這四種元素能發射離子熒光。
1、銪、釤的熒光特點：
峰移大：Eu 離子或Sm 離子經激發后，其激發光與發射光的光峰之間有一個很大的峰移(stoke shift)，大約有290nm, 發射光譜為
615nm或643nm，而激發光譜為337nm，不會相互重疊。
發射光譜范圍相當窄：特異性強，熒光測量可以在非特異性信號影響極小的波長進行，信噪比高。
射峰很陡峭：檢測裝置能調到非常精細的極限，從而易于區分不同的鑭系元素螯合物的發射信號，便于作雙標記。
熒光半衰期長：正常非特異性背景熒光的生命期是0·01微秒。銪螯合物的發射熒光衰變期超過430 微秒，釤螯合物為41微秒。
2、基本原理
由于銪、釤螯合物的紫外激發熒光、強度高、衰變時間長。而自然本底熒光較弱、衰變時間短。因此，采用激發后延時，使自然本底熒光完全衰變后再測量，即可排除背景光的干擾。即所謂的時間分辨熒光免疫分析（Time-Resolved
Fluoimmunoassay,TRFIA）
由于鑭系元素絡合物在水中的熒光很弱，加入增強溶液后，Eu離子或
Sm離子可以從此絡合物中解離出來形成新的絡合物，此新的絡合物在紫外光激發下，能產生延續時間更長的一定光峰的熒 光。
即所謂的分解－增強－鑭系熒光免疫分析 （Dissociation、 Enhanced Lanthanide Fluoimmunoassay,
DELFIA)。
目前國內使用的為芬蘭生產的設備和試劑。采用LKB分析系統以聚苯乙烯微孔條作固相載體。以聚羧基酸螯合劑作為Eu離子或 Sm離子連接 抗體或抗原的分子橋。熒光增強液在PH3.2下分解Eu 離子與二酮體 螯合劑形成新的螯合物與其他成份構成微粒膠囊復合物。
3、測量過程
激發光激發時間≤1微秒，波長340nm
延遲測量時間： 400微秒
測量時間400微秒
進行下周期測量 前恢復時間200微秒
測量每周期約需時間１毫秒
每孔測量時間１秒 (約1000個周期)
4、TRFIA與常用標記檢測技術(RIA、EIA)的比較：
標準曲線量程寬
靈敏度高10 12 ~ 10 15 g
重復性好：檢測1000次/秒 或16次/秒的測量均值，信息利用率高
試劑效期長：至少6個月
應用范圍廣(通過固相TRFIA 通用標記技術)
六、電化學發光：Electrochemilumiscence（ECL）
利用電極板上的氧化還原反應引起化學發光（德國BM公司）
用稀土元素釕（ruthenium）作標記
磁顆粒作B/F分離
可測量程達4個數量級
結果穩定
七、免疫反應體系
標記免疫檢測中的免疫反應原理相同，但被檢物的檢測方法有所不同：有雙位點夾心法、固相抗原競爭法、固相抗體競爭法、BAS增強雙位點夾心法等。
1、競爭性標記免疫檢測常用于測定半抗原類物質，如：
血清雌二醇(E2)，孕酮(P)，睪酮(T)
甲狀腺素，前列腺素類化合物
地高辛等
2、非競爭性標記免疫檢測常用于測定蛋白類化合物，如：
促甲狀腺激素(TSH)
垂體泌乳素(PRL)
卵泡刺激素(FSH)
黃體生成素(LH)
絨毛膜促性腺激素(hCG)
胰島素(Insulin)
痰胚抗原(CEA)
甲胎蛋白(AFP)等