實驗方法原理
RNaseⅠ
分解 RNA 形成 3'-磷酸單核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸,以 Cp 或 Up 結尾形成一個 2',3'-環狀磷酸中間體。
實驗材料 酶樣品
試劑、試劑盒 乙酸緩沖液乙酸鈾酰-高氯溶液RNA(酵母)溶液核酸核酸酶
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.6 ml 1% RNA 溶液
0.1 ml 酶(向空白對照中加入約 1.0 ml 0.1 mol/L 乙酸緩沖液,pH 5.0)
37℃ 培養 4 min,停止反應要加入 0.3 ml 乙酸鈾酰-高氯溶液冰上
防止 5 min,離心 5 min,然后稀釋 0.1 ml 上清液與 0.9 ml H2O
測量 260 nm 處增加的吸收值。
計算
1 個單位被定義為:在上述的條件下,37℃、pH 5.0 時,引起吸收值變化 1.0 的酶量。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/L 乙酸緩沖液,pH 5.0(5.7 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于 800 ml 水中,用 1 mol/L NaOH 調節至 pH 4.0,補充至 1 L)
乙酸鈾酰-高氯溶液(0.75% 乙酸鈾酰溶于 25% 高氯溶液)
RNA(酵母)溶液(50 mg/10 ml 溶于 0.1 mol/L 乙酸鈉緩沖液 pH 5.0)核酸核酸酶(1 mg/ml,使用前在 0.1 mol/L 乙酸鈉緩沖液 pH 5.0 中稀釋 100 倍)