核苷酸酶（nucleotidase）是指水解核苷酸的糖和磷酸間的鍵而生成無機磷酸和核苷的特異的磷酸酯酶。5′-核苷酸酶（EC3．1．3．5）可作用于 腺苷（次黃苷）-5′-磷酸，而對3′-磷酸則無作用。含于前列腺、精液、腦、網膜、蛇毒、馬鈴薯、酵母和大腸桿菌中。除大腸桿菌的胞周腔（periplasmic space）中存在這種酶可作為典型例子以外，在 高等動物細胞中，通常也是與 膜結構相結合而存在。3′-核苷酸酶（EC3．1．3．6）可以水解腺苷-3′-磷酸等，存在于麥芽、馬鈴薯和枯草桿菌中。[1]