核蛋白的免疫熒光定位實驗

實驗方法原理：免疫熒光細胞化學技術是采用熒光素標記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體復合物帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素發出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質，并可利用熒光定量技術計算抗原的含量，以達到對抗原物質定位、定性和定量測定的目的。

實驗材料：核蛋白
試劑、試劑盒：甲醇 PB 一抗 二抗
儀器、耗材：顯微鏡 玻片 蓋玻片 滴管

實驗步驟：
1.在22x22 mm 的1.5號蓋玻片上培養細胞。理想條件下細胞應長到50%~70%匯合。
2. 在-20℃用100%甲醇固定細胞3分鐘。
3.用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分鐘。
4.在濕盒里以適當濃度的一抗室溫溫育1小時。
5.用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分鐘。
6.在濕盒里與稀釋為4 ug/ml 的熒光標記二抗室溫溫育1小時。
7.用PBS洗四次，每次10分鐘。
8.用封片劑將蓋玻片封在載波片上，用干凈的指甲油將蓋玻片封邊，防止蓋玻片滑動。

注意事項：
1.要在蓋玻片一邊角落做記號，以知道細胞在蓋玻片的那一面。
2.一抗的濃度需要經過實驗摸索確定。
3.第四步中如果用22×22 mm 蓋玻片，則在蓋玻片上加30 ul 稀釋的抗體，并且將蓋玻片倒置在玻璃載玻片上，然后將載玻片放到濕盒里，在室溫溫育。

其他：
核蛋白是指在細胞質內合成， 然后運輸到核內起作用的一類蛋白質。如各種組蛋白、DNA合成酶類、RNA轉錄和加工的酶類、各種起調控作用的蛋白因子等。核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信號序列， 起蛋白質定向、定位作用。