核蛋白的提取方法

柱式法 Minute TM 胞質胞核分離試劑盒操作方法：

A． 懸浮細胞樣品（包括植物，細菌，酵母和真菌制備的原生質體）

1.500Xg，3 分鐘低速離心收集細胞，用預冷的 PBS 清洗一次

2. 將細胞轉移到 1.5 ml 離心管中，3000 rpm 離心 1-5 分鐘，棄去上清。

3. 按表格 1 加入適量的胞漿提取緩沖液（請注意樣品及裂解液的比例，以達到最佳效果）, 渦旋大力震蕩 15 秒, 冰上孵育 5 分鐘, 混勻. 接轉胞質胞核分離步驟。

B. 貼壁細胞

1. 貼壁細胞生長至融合度 90-100%，將預冷的 PBS 直接加入細胞培養板，培養皿或培養瓶中清洗細胞兩次，吸去上清。

2. 按表格 2 將適量的胞漿提取緩沖液均勻的加入整個器皿表面，冰上靜置 5 分鐘。用吸頭吹打幾次后轉移到預冷的 1.5 ml 離心管中。渦旋大力震蕩 15 秒。接轉胞質胞核分離步驟。（請注意樣品及裂解液的比例，如濃度較低請減少裂解液使用量）

C．組織樣品

1. 稱重適量組織樣品，放入預冷的 1.5 ml 離心管中。

2. 用預冷的 PBS 清洗組織樣品一次。3000rpm 離心 1 分鐘，棄去上清，盡可能的使沉淀干燥。

3. 按表格 3 加入適量胞漿提取緩沖液，用微型管杵或微粉碎機勻漿，去除沒有完全勻漿的組織碎片。接轉胞質胞核分離步驟。

胞質胞核分離步驟

1. 4oC，最高速 (14000-16000 rpm) 離心 5 分鐘

2. 將上清液（上清為胞漿組份）轉移到一個新的預冷的 1.5 ml 離心管中。將沉淀（可選優化：用 0.5 ml 預冷 PBS 重懸，10000 rpm，離心 3-5 分鐘清洗沉淀可以減少胞漿蛋白污染）中加入適量的胞核提取緩沖液，渦旋大力震蕩 15 秒，冰上孵育 1 分鐘。

然后重復震蕩 15 秒，冰上孵育 1 分鐘四次。（如核蛋白提取濃度低，可適當延長每次孵育及震蕩時間）

3. 迅速將核提取物轉入到預冷的離心管套管中，14000-16000 rpm，離心 30 秒。棄掉離心管柱。將核蛋白儲存于-80℃。一般產量 1.5-2.5 mg/ml。