核酶切割RNA專一位點

合成的核酶分子 切割底物RNA

Tris-HCl MgCl2

一、材料與設備

1)500 mmol/LTris-HCl(pH7.4)

2)100 mmol/LMgCl₂

3) 合成的核酶分子

4) 切割底物 RNA


二、操作方法

1) 制備切割混合構：不超過 l0 pmol 底物 RNA，l pmol 合成的核酶分子，加水至 8ul, 加 l ul 500 mmol/L Tris-HCl(PH7.4)，混勻。

2) 于 75℃ 加熱 1 min, 然后置于冰上。

3) 加 1ul 100 mmol/L,MgCl₂ 于 42℃ 孵育 lh。

4) 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，回收。

1) 切割底物 RNA 和核酶可以通過體外轉錄的方式獲得。

2) 切割底物 RNA 要與核酶匹配，若底物與核酶具較長的堿基配對則可以提髙酶切的特異性，但會降低切割轉換數，因此一般選擇 5-7 個核苷酸作為互補匹配區。

3) 為獲得最佳的切割效果，底物 RNA、核酶的用量，鎂離子的濃度、反應溫度和反應時間均應通過試驗確定。