核酸的定量測定實驗

核酸

氨水 鉬酸銨-高氯酸試劑 蒸餾水

分析天平 離心機 容量瓶 紫外分光光度計 吸管 冰浴鍋

1.  用分析天平準確稱取待測的核酸樣品500 mg , 加入少量蒸餾水調成糊狀, 再加入少量的水稀釋。然后用5% ～6% 氨水調至pH7 , 定容到50 ml 。

2.  取兩支離心管, 向第一只管內加入2 ml 樣品液和2 ml 蒸餾水, 向第二只管內加入2 ml 樣品液和2 ml 沉淀劑( 以除去大分子核酸) 作為對照。混勻, 在冰浴中放置30 min 后離心( 3000 r/ min) , 從第一、第二管中分別吸取0.5 ml 上清液, 用蒸餾水定容到50 ml。用光程為1 cm 的石英比色杯于260 nm 波長處測其光吸收值( A1 和A2) 。

【結果處理】
 

DNA (RNA)% = [ (A1 - A2) / 0 . 020 (或0 . 022 ) ] (μg/ ml)×100/ 樣品濃度(μg/ ml ) 樣品濃度= 500 mg/ ( 50 ×4/ 2 ×50/0 . 5)  ml = 50 μg/ ml。