實驗方法原理 核酸、核苷酸及衍生物都具有共軛雙鍵系統, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波長處。一般在260 nm 波長下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值為0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值約為0.020 , 故測定未知濃度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。此法操作簡便、迅速。若樣品內混有大量的核苷酸或蛋白質等能吸收紫外光的物質, 則測定誤差較大, 故應該先除去。
實驗材料 核酸
試劑、試劑盒 氨水鉬酸銨-高氯酸試劑蒸餾水
儀器、耗材 分析天平離心機容量瓶紫外分光光度計吸管冰浴鍋
實驗步驟
1. 用分析天平準確稱取待測的核酸樣品500 mg , 加入少量蒸餾水調成糊狀, 再加入少量的水稀釋。然后用5% ～6% 氨水調至pH7 , 定容到50 ml 。
2. 取兩支離心管, 向第一只管內加入2 ml 樣品液和2 ml 蒸餾水, 向第二只管內加入2 ml 樣品液和2 ml 沉淀劑( 以除去大分子核酸) 作為對照。混勻, 在冰浴中放置30 min 后離心( 3000 r/ min) , 從第一、第二管中分別吸取0.5 ml 上清液, 用蒸餾水定容到50 ml。用光程為1 cm 的石英比色杯于260 nm 波長處測其光吸收值( A1 和A2) 。
【結果處理】
DNA (RNA)% = [ (A1 - A2) / 0 . 020 (或0 . 022 ) ] (μg/ ml)×100/ 樣品濃度(μg/ ml ) 樣品濃度= 500 mg/ ( 50 ×4/ 2 ×50/0 . 5) ml = 50 μg/ ml。