核酸提取儀應用范圍及幾種核算提取方法

發布時間：2020-09-21 17:50 原文鏈接：核酸提取儀應用范圍及幾種核算提取方法

核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

核酸提取儀應用范圍及幾種核算提取方法介紹

幾種核算提取方法介紹

（1）濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M Nacl抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的CCL3一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及CCL3相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95％乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.

也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按CCL3---異醇法除去蛋白.

兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.

以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉Nacl溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.

（2）陰離子去污劑法:

用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.

（3）苯酚抽提法:

苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 .

（4）水抽提法:

利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95％乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66％ ?80％和95％乙醇以及丙銅洗滌。