核酸提取分離方法
核酸提取分為傳統方法和商業化試劑抽提。
傳統的方法一般會采用酚/氯仿抽提及乙醇沉淀來提取核酸。
商業化試劑盒方法提取核酸,比較經典的是采用離心柱法,將硅膠膜固定在離心管中,通過離心力或者負壓讓液體通過硅膠膜,核酸就留在膜上。在經過洗滌、洗脫的步驟得到核酸。商業化試劑盒的應用還能避免試劑污染。
不管是傳統的方法,還是商業化試劑盒方法,都需要注意下面這些問題。
溫度
核酸是非常敏感脆弱的樣品,所以離心機的控溫性能要好,才能防止核酸降解。
離心的溫度盡量維持在 4 ℃,轉子的材料也要盡量選用導熱性能好的材料,防止樣品溫度和設置的溫度偏差變大。
角度與離心力
轉子的設計角度, 45° 角轉是比較優秀的,便于核酸的收集,還能減少樣品的損失。離心力設置盡量大于 10,000 x g, 離心力越大,離心時間越短。
其他注意點
● 提取核酸的試劑會有一定的腐蝕性,為了防止試劑腐蝕轉子,最好選擇帶 PTFE 涂層的轉子,這種涂層耐酸、耐堿、耐各種有機溶劑。
● 在使用試劑盒抽提的時候,要盡量選用試劑盒專用的 Kit 轉子,不需要剪蓋,轉子邊緣采用加寬設計防止打掉離心管蓋。