核酸電泳的步驟方法介紹

核酸電泳是進行核算研究的重要手段，常用于和瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠兩種，凝膠電泳操作簡單，是分離鑒定和純化核算的一種常用方法，那么核酸電泳的步驟有哪些的呢？

瓊脂糖凝膠電泳的步驟：

用透明膠將玻璃板或電泳裝置所配備的塑料盤的邊緣圈封，制成膠模，置水平工作臺上；

(2) 稱取適量瓊脂糖，置電泳緩沖液中，加熱使瓊脂糖溶解；

(3) 待溶液冷至60℃，加入10mg/ml EB貯存液，使終濃度達0.5mg/ml；

(4) 在距離膠模底板0.5-1mm處放置電泳梳，將瓊脂糖溶液倒入膠模中，厚度約3-5mm，注意避免產生氣泡；

(5) 凝膠完全凝固后，移去梳子和透明膠，將凝膠放入電泳槽。加入TBE緩沖液使恰好沒過膠面約1mm；

(6) 將DNA樣品與1/6體積加樣緩沖液混合后，加入樣品槽中；

(7) 接通電源，使樣品槽在負極端，用1-5v/cm的電壓，電泳適當時間；

(8) 電泳結束后，可將含EB的凝膠直接放在紫外線檢測儀上觀察，并拍照記錄，也可將不含EB的凝膠在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分鐘，再如上觀察和拍照，記錄結果。

聚丙烯酰胺凝膠電泳的步驟:

(1) 配制試劑

① 30%丙烯酰胺：100ml雙蒸水中含29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺。

② 5×TBE　每升溶液含54g Tris.HCl，27.5g硼酸和20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)。

③ 10%過硫酸銨：10ml雙蒸水中含1g過硫酸銨。

(2) 裝置膠模　將玻璃板和墊條事先用去污劑刷洗，并經自來水和無離子水沖洗干凈，晾干。裝置時，將較大的玻璃板平放在工作臺上，將兩個墊條放在玻璃板兩側，涂上少量凡士林，并將上層玻璃板置于墊條上，用夾子將玻板連同墊條夾緊，底部用1%瓊脂糖密封。為防止漏膠，除放梳子一邊外，其余三邊應用防水膠帶密封。

(3) 根據玻璃板大小及夾層厚薄計算所需凝膠溶液量，按表配制溶液(100ml)。

將35μl TEMED加入100ml混合液中，混勻，然后均勻連續注入兩玻璃板空隙中。

(4) 立即插入電泳梳，勿使梳齒下形成氣泡。

(5) 室溫聚合1小時，梳齒下出現折光帶時，表明聚合反應已經完成。若凝膠不立即使用，可用紗布或濾紙(用1×TBE浸泡)包蓋于凝膠頂部，置4℃保存1-2天。

(6) 拔去梳子，立即用水沖洗加樣孔。

(7) 除去底部膠帶，將凝膠直立放入電泳槽。在上下兩槽中灌好1×TBE溶液，驅盡凝膠底部附著的氣泡。并用1×TBE溶液沖洗加樣孔；

(8) 將核酸樣品與適量6×凝膠加樣緩沖液(見表2-28)混合，并加入凝膠加樣孔中；

(9) 接通電源，正極與下槽連接。電壓一般控制在1.8v/cm。電壓過高時凝膠產生的熱量可造成DNA區帶彎曲，甚至引起小DNA片段的解鏈；

(10) 電泳畢，取下玻板和凝膠，放在工作臺上，從夾層一角輕撬，將上面的玻板輕輕移開，并小心揭下凝膠，置染色液中染色并進行結果觀察。