一、原理
以根癌農桿菌介導的遺傳轉化是目前最有效的途徑之一。根癌農桿菌對植物釋放的化學物質產生趨化反應，向植物受傷組織集中。經共培養后，受傷部位的化學誘導物透過農桿菌的細胞膜使Ti質粒上的Vir基因活化。Vir基因產物使Ti質粒上的T－DNA進入植物細胞，并整合到植物核基因組中。插入在T－DNA左右邊界區內的目的基因也隨之整合到植物染色體上，從而使目的基因在植物細胞中得到表達。
二、目的
了解根癌農桿菌介導的植物基因轉化的方法和用途，掌握葉盤轉化法的基本原理和操作。
三、材料、試劑和器具
1、煙草、甘藍無菌苗或田間生長的植株。
2、含目的基因的共整合載體或雙元載體的根癌農桿菌。
3、YEB液培養基。
4、抗菌素儲備液(Kan, Cif, Rif, Amp)。
5、MS基本培養基。
6、MS分化培養基。
7、70％乙醇。
8、0.1%升汞。
四、操作步驟
1、取幼嫩健康的葉片，用蒸餾水沖洗一遍，70％乙醇洗45秒，0.1%升汞消毒6－8分鐘，無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干水分。
2、將無菌葉片剪成份0.5cm×0.5cm的小塊，葉片近軸面向下，接種在愈傷組織誘導或分化培養基上，預培養2－3天。
3、挑取一個單菌落根癌農桿菌，接種到20ml附加相應抗生素的YEB培養液中，在27℃恒溫搖床上培養到OD值為0.6-0.8。取上述上培養物按1％－2％的比例，轉入新鮮的無抗菌素的YEB培養液中，繼續培養6小時，當OD值為0.2-0.5時即可用于轉化。
4、在超凈工作臺上，將菌液倒入無菌小培養皿，從培養液中取出預培養的外植體，放入菌液中泡1－5分鐘。取出外植體在無菌濾紙上吸去附著的菌液。然后接種在愈傷組織誘導或分化培養基（煙草的培養基為MS附加IAA0.5mg/L,
BA2.0mg/L）上，28℃暗培養2－4天。
5、將經過共培養的外植體轉移到加有選擇壓的脫菌分化和愈傷組織誘導培養基上。在光照的條件下，25℃進行選擇培養。
6、選擇培養2－3周后，外植體的轉化細胞將分化出抗性不定芽，或者產生抗性愈傷組織。將這些抗性材料轉移到相應繼代選擇培養基上，或者轉入附加選擇壓的生長和分化培養基中，令其生長和誘導分化。
7、待不定芽長到1cm以上時，切下并插入含有選擇壓的生根培養基上進行根培養，兩周左右長出不定根。