梅毒防控重在檢測策略電化學發光法成主流

　　 日前，在“2017中國醫師協會檢驗醫師年會暨第十二屆全國檢驗與臨床學術會議”上，四川大學華西醫院實驗醫學科陶傳敏教授分享了國際權威梅毒管理指南及國內外大型研究對于梅毒實驗室檢測方法和標準檢測流程的臨床應用評估及推薦，就梅毒感染的實驗室檢測策略及不同流程的應用進行了深入分析與探討。

　　梅毒感染實驗室檢測

　　首選特異性檢測方法

　　梅毒實驗室檢測方法主要分成三大類：病原體檢測、核酸檢測和血清學檢測。病原體檢測主要是用暗視野顯微鏡和鍍銀染色，方法繁瑣不適合實驗室常規檢測；核酸方法和病原體檢測都受病原體在局部的影響，容易發生漏檢。因此，血清學檢測是實驗室診斷梅毒的主要手段。

　　血清學檢測包括非梅毒螺旋體抗原試驗（NTT）和梅毒螺旋體抗原試驗（TT）。前者屬于非特異性抗體檢測，這可能會在自身免疫性疾病患者或孕婦中呈假陽性以及在晚期患者中呈假陰性。后者屬于特異性檢測，這類方法檢測的是梅毒螺旋體特異性抗體，特異性及敏感度均較高。

　　梅毒實驗室檢測流程主要包括傳統檢測流程和反向檢測流程，兩者的區別在于采用哪一種方法作為初篩的檢測手段。傳統檢測流程是先進行NTT，結果陽性的患者再進行TT，結果陽性確認新感染或曾經治療過；反向檢測流程反之，對于TT結果陽性的患者進行NTT，若結果陰性再進行第二種TT檢測，結果陽性則表示近期再次感染或曾經治療過。現在還有一種是歐洲疾病預防控制中心（ECDC）流程，這是一個更簡化的反向流程，先進行TT，結果陽性的患者直接再進行第二種TT檢測。

　　目前，對于梅毒的實驗室篩查與診斷流程，越來越多地傾向于用反向檢測流程。美國疾病控制中心發布的《2015性傳播疾病治療指南》提出反向流程對患者診斷更為全面，能夠檢測出既往治療過、未治療或不完全治療的梅毒患者，以及低感染率人群的假陽性情況。《2014歐洲梅毒管理指南》推薦TT作為單獨的初篩方法，并應采用全自動EIA/CIA，NTT只能檢測到現癥梅毒，相比TT會漏檢早期的梅毒感染。《2015英國梅毒管理指南》也推薦EIA/CLIA作為初篩方法，同時檢測免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG），并特別提到初篩陽性后再用另一種TT方法進行確認。

　　陶傳敏教授指出：“我國現在絕大部分實驗室和血站主要是用反向檢測流程，用特異性抗體首先開始進行篩查，對于篩查陽性的患者建議做非特異性檢測，同時結合臨床表現和流行病學史進行診斷。對性病門診患者沒有必要區分反向流程和傳統流程，應該建議患者同時做這兩類不同的實驗室檢測，這樣可以節約時間。”

　　電化學發光檢測方法

　　有效提高梅毒檢測質量

　　梅毒螺旋體抗原極不穩定，試劑性能的優異取決于更高的設計標準。對于免疫試劑的設計，抗原的篩選和制備工藝需要非常考究。羅氏診斷對抗原組合進行嚴格篩選和評估，最終選取了最有優勢的抗原成分進行重組；同時優化了抗原序列，以實現試劑的穩定性和特異性，并采用了易大規模生產的高可溶性抗原，配合羅氏專有的解決方案，即抗原伴侶的應用，與天然抗原極度接近的表位的表達，實現只與抗原伴侶結合，不和特異性抗體結合，從而降低假陽性率。羅氏診斷ElecsysR Syphilis梅毒螺旋體抗原特異性抗體電化學發光檢測試劑盒于 2014 年 8 月正式在中國獲批上市。該技術使用雙抗原夾心法（DAGS）檢測梅毒螺旋體總抗體，血清樣本僅需10μL，在18分鐘時間內即可完成整個檢測過程，是目前可靠、高效的梅毒特異性檢測方法。

　　2015年，Clinical and Vaccine Immunology雜志發表了一項由全球6個國家8家研究中心參與的梅毒檢測國際多中心研究結果，四川大學華西醫院是8家研究中心之一，且國內只有此中心提供相應數據，參加了歐洲同步的性能評估。結果顯示：與其它方法學梅毒檢測試劑相比，羅氏診斷ElecsysR Syphilis梅毒螺旋體抗體檢測在靈敏度、特異性、臨床樣本敏感性等綜合性能表現最佳，并且可100%檢測出不同分期梅毒感染樣本。

　　2016年，微生物學領域經典期刊Journal of Clinical Microbiology雜志發表了一項對六種自動化梅毒螺旋體抗體檢測方法的比較研究結果，對比其它方法學梅毒檢測試劑，ElecsysRSyphilis梅毒螺旋體抗體檢測的敏感性、特異性和一致性表現優異，其中，敏感性達到99.4%，特異性達到100%，一致性是99.8%，無一例假陽性結果和漏檢情況發生。

　　陶教授指出：“臨床上有一些潛在因素，如合并其它傳染病、自身免疫性疾病、腫瘤、妊娠等，可能會干擾到梅毒的實驗室檢測結果，因此，選擇抗干擾能力強的檢測方法對于檢測結果的準確性至關重要。”ElecsysR Syphilis梅毒螺旋體抗體檢測采用抗干擾模式，可有效避免交叉反應，針對干擾樣本的評估研究顯示，具有很好的特異性與靈敏度，對人類免疫缺陷病毒感染、EB病毒（EBV）感染和萊姆病（Lyme）的特異性均達到100%。

　　為提供更具參考性的中國證據及使用經驗，四川大學華西醫院聯合全國其它14家醫院共同開展了“羅氏診斷新一代ElecsysR Syphilis梅毒螺旋體抗體檢測試劑性能比對多中心研究”，旨在自然條件下比較ElecsysR Syphilis檢測試劑與已在國內上市的其它四種梅毒檢測試劑的靈敏性與特異性。共納入13,767例常規隨機樣本，是全球樣本最多的試驗之一。該研究結果表明，ElecsysR Syphilis在所有比對組常規隨機樣本中的敏感度均達到100%，特異性也更優異；ElecsysR Syphilis在所有比對組“臨界”樣本中的假陽性和假陰性結果更少。