1.顯微鏡檢查
直接涂片檢查發現革蘭染色陰性杜克雷嗜血桿菌。此法敏感性差。
2.培養法
杜克雷嗜血桿菌培養陽性。
3.病理學檢查
有符合軟下疳潰瘍的組織病理表現。組織切片中有時可找到杜克雷嗜血桿菌。
4.核酸檢測
聚合酶鏈反應法等檢測杜克雷嗜血桿菌核酸陽性。