一、原理
LoWry法是雙縮脲法（Biuret）和福林酚法（Folin-酚）的結合與發展。其原理是蛋白質溶液用堿性銅溶液處理后，堿性銅試劑與蛋白質中的肽鍵作用產生雙縮脲反應，形成銅—蛋白質的絡合鹽。再加入酚試劑后，在堿性條件下，這種被作用的蛋白質上的酚類基團極不穩定，很容易還原酚試劑中的磷鎢酸和磷鉬酸，使之生成磷鎢藍和磷鉬藍的混合物。這種溶液藍色的深淺與蛋白的含量成正相關，所以可以用于蛋白質含量的測定。
LoWry法除使肽鏈中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等顯色外，還使雙縮脲法中肽鍵的顯色效果更強烈，其顯色效果比單獨使用酚試劑強3-15倍，約是雙縮脲法的100倍。由于肽鍵顯色效果增強，從而減少了因蛋白質種類不同引起的偏差。LoWry法適于微量蛋白的測定，對多個樣品同時測定較為方便。但對不溶性蛋白和膜結合蛋白必須進行預處理（如加入少量的SDS）。
1.雙縮脲法的原理雙縮脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）在堿性溶液中可與銅離子產生紫紅色的絡合物，這一反應稱為雙縮脲反應。因為蛋白質中有多個肽鍵，也能與銅離子發生雙縮脲反應，且顏色深淺與蛋白質的含量的關系在一定范圍內符合比爾定律，而與蛋白質的氨基酸組成及分子量無關，所以可用雙縮脲法測定蛋白質的含量。
雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的范圍為1-10mg蛋白質，適于精度要求不太高的蛋白質含量的測定，能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是靈敏度差、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩沖液，如Tris緩沖液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉淀。
2.福林-酚法的原理
該方法是雙縮脲法的發展，包括兩步反應：
（1）在堿性條件下，蛋白質與銅作用生成蛋白質—銅絡合物。
（2）此絡合物將試劑磷鉬酸—磷鎢酸（Folin試劑）還原，混合物深藍色（磷鉬藍和磷鎢藍混合物），顏色深淺與蛋白質含量成正比。此方法操作簡便，靈敏度比雙縮脲法高100倍，定量范圍為5-100μg蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物，均有干擾作用。此方法的缺點是有蛋白質的特異性影響，即不同蛋白質因絡氨酸、色氨酸含量的不同而使顯色強度稍有不同，標準曲線也不是嚴格的直線形式。
二、儀器與用具
試管若干；刻度移液管0.5ml 1支，1ml 1支，10ml 1支；定量加樣器；圓底燒瓶；冷凝管1套（帶橡膠管）；微量滴定管；小燒杯；微量進樣器50μl 1支；721分光光度計；恒溫水浴器；研缽；玻棒；離心機；離心管。
三、試劑
Na2WO4·2H2O；Na2MoO4·2H2O；85%H3PO4；濃HCl；Li2SO4·H2O；溴水；酚酞指示劑；Na2CO3；NaOH；CuSO4·5H2O；酒石酸鉀鈉；牛血清白蛋白。
四、方法
1.試劑的配制
（1）堿性銅試劑（相當于雙縮脲試劑）的制備
首先配制A液：4%碳酸鈉（Na2CO3）溶液與0.2mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液等比例混合（2%Na2CO3，0.1mol NaOH）；B液：1%硫酸銅（CuSO4·5H2O）溶液與2%酒石酸鉀鈉溶液等比例混合（0.5%CuSO4·5H2O，0.1%酒石酸鉀鈉）。在使用前將A液與B液按50∶1的比例混合即成。此為FolIn－酚試劑甲液，此試劑只能使用1天。
酚試劑（相當于Folin試劑）的配備：稱取鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O）100g、鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O）25g，加蒸餾水700ml溶解于1500Ml的圓底燒瓶中。之后加入85%的H3PO450ml，濃HCl 100ml，安上回流裝置（使用磨口接頭，若用軟木塞或橡皮塞時，就必須用錫鉑紙包起來），使其慢慢沸騰10H。冷卻后加入硫酸鋰（Li2SO4·H2O）150g，水50ml，溴水2~3滴，不用回流裝置開口煮沸15min，以釋放出過量的溴。待冷卻后稀釋至1000ml，并過濾入棕色瓶中，密閉于冰箱中保存（冷卻后溶液呈黃色，倘若仍呈綠色，須再滴加數滴液體溴，繼續煮沸15min）。使用時用標準NaOH溶液滴定，以酚酞作為指示劑，滴定終點由藍變灰，滴定后算出酸的濃度。使用時大約加水1倍，使最終濃度相當于1mol/L H+酸，此為Folin-酚試劑乙液（Folin試劑）。
在測定時要注意，因為酚試劑僅在酸性條件下穩定，但此實驗的反應只在PH值為10的情況下發生，所以當加酚試劑時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞前即能發生還原反應，否則會使顯色程度減弱。
（2）標準蛋白質溶液的配制 稱取25mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸餾水中，使最終濃度為250μg/ml。
2.標準曲線的繪制
（1）取7支試管，編號后，分別加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml標準蛋白質溶液，用蒸餾水補足1ml，使每管含蛋白量分別為0μg、25μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg（必要時可做重復）。
（2）在每支試管中用定量加樣器加入5ml甲液，混勻，于30℃下放置10min。
（3）在每支試管中噴射加入0.5ml乙液，立即振蕩混勻，在30℃下保溫30min。
（4）準確到30min后，以不加標準蛋白試管中的溶液為空白，在500nM下用1cm光徑的比色杯對系列標準蛋白溶液進行比色，測定光密度值。
以蛋白濃度為橫坐標，光密度值為縱坐標，繪制標準曲線。
3.樣品的測定
（1）樣品的提取：稱取鮮樣0.5g，用5ml蒸餾水或緩沖液研磨提取。
取1.0ml（視蛋白質含量適當稀釋）樣液加入試管中，然后重復步驟2的（2）、（3）、（4），以標準曲線中的0管為空白，測定吸光值。
（2）根據吸光值查標準曲線，求出比色液中的蛋白質含量。
4.結果計算
樣品中蛋白的含量（mg/g）=C×VTV1×FW×1000
式中C：查標準曲線值（μg）；VT：提取液總體積（ml）；FW：樣品鮮重（g）；V1：測定時加樣量（ml）。
五、注意
還原物質，其他酚類物質及檸檬酸對此反應有干擾。